组织培养类器官分离：
添加含有双抗、庆大霉素的类器官缓冲液浸泡，用眼科镊刮去组织血液，粘膜，肠绒毛等。在培养皿中用类器官缓冲液清洗三次（每次更换培养皿）后剪碎，剪成大约1mm3的组织块
1.为了促进 BME 的去除，将组织置入15ml离心管，加入 10 mL 冰预冷的 DMEM/F12培养基，在 4°C 条件下以 200 g 的转速离心 5 分钟。
2.吸出上清液，采用 TrypLE 或机械破碎来分解类器官，前者适用于头颈部和紧实的乳腺、结肠、胰腺和肝脏类器官，后者适用于卵巢和囊性的乳腺、结肠、胰腺和肝脏类器官。
OrgCult™-Brain(XF)脑癌类器官培养基(启达货号：QD1900)
机械破碎法：
将沉淀重悬在 3 mL DMEM/F12 培养基中。在移液器上装上 P1000 带滤芯吸头和（不带滤芯）P10 吸头，上下吹打类器官悬液 30 -50次。枪头紧靠管的底部来产生更大压力，有助于类器官的分解。
TrypLE消化法：
1.将沉淀重悬在 3-5 mL TrypLE 中，上下吹打并在 37°C 条件下孵育，直至类器官分解。在移液器上装上 P1000 带滤芯吸头和（不带滤芯）P10 吸头，每 3～5 分钟上下吹打 ≥ 10 次，以促进类器官的分解。密切监控消化过程，尽量缩短 TrypLE 的孵育时间，不同类型或者量的组织，消化时间不同，消化时间不宜过长。例如穿刺样本为 10 min，小的组织碎片团为 30 min～1 h。
2.使用 P1000 移液器上下吹打 10～20 次，进一步促进组织破碎。从顶部加入10ml含有10%
KOSR-SerumReplacer
3.将沉淀重悬在 含有10%KOSR-SerumReplacer
4.对重悬和过滤后的细胞进行离心，在 4°C 下以 200 g 离心 5 分钟
注意的小细节：
如果过筛后的细胞沉淀呈红色，可能有血红细胞污染，建议加入 5 mL 红细胞裂解液 4°C 处理 5 分钟。完成裂解后，在 15 mL 管中加满 PBS 清洗一次，然后在 4°C 下 500 g 离心 3 分钟。
类器官培养：
将消化好的细胞悬液计数，按照1-2万细胞每孔计算所需的细胞数，根据计算好的体积吸取细胞悬液加入预冷的1.5 mL离心管中，补齐预冷的培养基至所需体积，将预冷后的细胞悬液加入等体积的Matrigel基质胶中轻轻混匀(全程冰上操作)，然后将细胞与基质胶的混合液按照40 μL/孔（不低于10,000 个细胞/40ul)接种于24孔板。将接种好的培养板放入培养箱至少30 min，待Matrigel完全凝固，然后沿24孔壁每孔缓慢加入500 μL预先恢复至室温的类器官培养基，3天后镜下观察类器官形成情况，粒径大于50 μm即认为类器官已经形成，每5天更换一次培养基进行培养，持续观察类器官大小，镜下观察大部分类器官大小均大于50 μm且大小不再增大即可收集类器官进行后续实验。
类器官传代
待器官形成并且不再增殖后，收集类器官
加入组织消化液37°消化10-15min
使用KOSR-SerumReplacer
使用100μm孔径的筛网进行过滤
1500 rpm离心3 min，弃上清，使用HBSS重悬沉淀后1500 rpm再次离心3 min；加入预冷的类器官培养基进行重悬，计数，按照培养步骤操作继续培养
类器官冻存：采用启达生物组织/类器官冻存液直接冻存（货号：SD0055）冻存后需程序降温，第二天移入液氮。
组织/类器官冻存液Tissue/organoid cryopreservation solution(XF)
(启达货号：SD0055)
