关于生信分析或基础研究,我们遵循“表达有差异,差异影响表型”的原则。符合以上两条,文章就已经成型了。分子机制的探究,是升华。然而,纯生信已经很难,甚至无法发表论文了。因此,我们必须掌握差异表达相关的实验操作。实验相关技能,我们可以按照中心法则的思路进行梳理和归类。在研究基因功能时,无论是过表达,还是基因敲除,我们都需要通过PCR获得产物,构建载体;在转录水平验证时,我们可以通过RT-PCR检测基因的表达及其变化。高通量测序和单细胞测序本质上还是PCR,只是条件更加严格和精细了。目前,随着PCR检测试剂盒的完善和升级,我们只需要准备好用的模板以及特异的引物,那么,PCR这项实验技术,是非常简单的!当然了,在实际操作中,反应体系可以调整,反应条件可以优化,以便得到更好的结果。今天,我们简单分享下引物设计。
第一步,在浏览器上检索NCBI Blast。
第二步,进入Primer-BLAST。
第三步,设置PCR引物的参数。
第四步,获得引物序列,送公司合成。
一般网页提供十对引物序列,根据需要选取一对或数对引即可。
芒果团队致力于为果友们提供小而专、精而美的生信实用技能,搭建临床和科研沟通的桥梁,并结合临床知识和科学前沿,与医生朋友一起成长,共同进步,让科研惠及医生,惠及大众!我们将秉承愚公移山、跬步千里的精神,聚焦生信、临床和基础研究三大版块,力争把领域内的小事情做到极致!
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