神经调节蛋白1的用途 【专利摘要】本发明公开了一种神经调节蛋白1的用途，属于生物医学【技术领域】。具体为神经调节蛋白1在制备治疗铅中毒性脑病药物方面的应用。铅中毒性脑病的特征是炎性细胞、炎性因子的高表达和广泛的神经细胞死亡。神经元丢失和神经炎性反应在铅中毒性脑病过程中起着至关重要的作用。神经调节蛋白1在铅中毒性脑病中有明显的抗神经炎性反应和保护细胞凋亡的作用，能抑制炎性活化，减少小胶质细胞和星形胶质细胞的数量，降低炎症细胞因子COX-2表达水平，改善铅中毒引起的学习记忆能力障碍。另外，神经调节蛋白1能增加ErbB4阳性细胞数，提高抗凋亡蛋白Bcl-2的抑制凋亡活性，减少促凋亡蛋白Bax的表达，从而抑制凋亡发生，对铅中毒性脑病有明显的神经保护作用。 【专利说明】神经调节蛋白1的用途 【技术领域】 [0001]本发明涉及神经调节蛋白I的用途，具体涉及神经调节蛋白I在制备治疗铅中毒性脑病药物方面的应用，属于生物医学【技术领域】。 【背景技术】 [0002]铅(Lead，Pb)是常见的重金属环境污染物之一，已经成为危害人类健康的重大问题。长期小剂量接触铅可引起多系统的损伤，神经系统更为明显。铅暴露使小鼠脑内的星形胶质细胞和小胶质细胞等炎性细胞活化，活化后的炎性细胞分泌炎性因子如COX-2、iNOS、IL-6等，这些炎性因子可以诱导细胞凋亡，从而导致学习记忆能力降低。脑室内注射铅引起小鼠学习记忆能力降低。 [0003]细胞凋亡与铅中毒性脑病的关系密切。蒋军军等研究发现，铅对培养的小鼠星形胶质细胞有促进凋亡作用，Bax/Bcl-2比值升高。此外，高表达Bax对抗Bcl_2的抑制凋亡活性。30mg/kg的铅暴露后Bax表达升高。由此推测醋酸铅具有很强的神经神经细胞毒性，从而加剧神经元的凋亡甚至死亡。任振华等发现，小鼠脑室注射醋酸铅能明显降低小鼠的学习记忆功能，增加小鼠的自主活动次数。铅中毒能直接导致细胞凋亡，而凋亡在神经元丢失中起了重要作用。Bcl-2家族蛋白是细胞凋亡的调控蛋白。神经元丢失在铅中毒的发展中起着举足轻重的作用，探索一种新的抗凋亡方法显得非常重要。 [0004]神经调节蛋白1 (Neuregulinl, NRGl)是一种营养因子与表皮生长因子样结构域家族，包含一个超过15个跨膜蛋白的结构域。NRGl与其受体ErbB4在中枢神经系统的神经发育、神经迁移、轴突伸展等过程发挥重要作用。NRGl基因已被证明可以保护大脑皮层神经元、多巴胺能神经元和运动神经元等。NRGl减少β1-42或C-末端的APP诱导的乳酸脱氢酶释放和减少TUNEL阳性细胞数。NRGl在帕金森氏病小鼠模型还可以保护多巴胺能神经元，并增加腹侧海马神经发生和抗抑郁作用。NRGl也可抑制脑缺血再灌注损伤，保护缺氧缺糖诱导的少突胶质细胞祖细胞的凋亡。但其能否在铅中毒性脑病中发挥作用仍未见报道。  【发明内容】  [0005]本发明的目的是提供一种神经调节蛋白I的用途。 [0006]为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是: [0007]神经调节蛋白1的用途，具体的，神经调节蛋白I在制备治疗铅中毒性脑病药物方面的应用。 [0008]更具体的，神经调节蛋白1I在制备减少脑内小胶质细胞和星形胶质细胞数量的药物方面的应用；神经调节蛋白1在制备降低炎症细胞因子C0X-2表达水平的药物方面的应用；神经调节蛋白1在制备增加ErbB4阳性细胞数量的药物方面的应用；神经调节蛋白1在制备提高抗凋亡蛋白Bcl-2抑制凋亡活性的药物方面的应用；神经调节蛋白1I在制备降低促凋亡蛋白Bax表达水平的药物方面的应用；神经调节蛋白1在制备改善学习与记忆能力障碍的药物方面的应用。[0009]神经调节蛋白I的用途，主要体现为取有效量的神经调节蛋白I与常规赋形剂如填充剂(糖醇类如乳糖、淀粉等)、润滑剂(如硬脂酸镁、硬脂酸钙等)、助流剂(如气相二氧化硅等)、稳定剂(如抗氧化剂等)、增塑剂、崩解剂等制备成药物剂型，如片剂、胶囊剂、注射液等。[0010]本发明的有益效果: [0011]神经调节蛋白I应用于制备治疗铅中毒性脑病药物，能抑制炎性活化，减少小胶质细胞和星形胶质细胞的数量，降低炎症细胞因子C0X-2表达水平，改善铅中毒引起的学习记忆能力障碍。另外，神经调节蛋白I能增加ErbB4阳性细胞数，提高抗凋亡蛋白Bcl-2的抑制凋亡活性，减少促凋亡蛋白Bax的表达，从而抑制凋亡发生，对铅中毒性脑病有明显的神经保护作用。 【专利附图】  【附图说明】 [0012]图1为本发明实施例1中NRGl P I处理组与对照组小鼠脑内C0X-2检测结果对比图； [0013]图2为实施例1中NRGl P I处理组与对照组小鼠Morris水迷宫学习与记忆检测结果对比图。 【具体实施方式】 [0014]下述 实施例仅对本发明作进一步详细说明，但不构成对本发明的任何限制。 [0015]实施例1 [0016]神经调节蛋白I在制备治疗铅中毒性脑病药物方面的应用。 [0017]一、材料和方法 [0018]1、动物分组 [0019]C57BL/6购自于郑州大学实验动物中心，雄性，6月龄。醋酸铅动物模型造模:采用经典的铅中毒性脑病造模方法:腹腔注射醋酸铅溶液30mg/kg体重，隔日一次，共注射7次。醋酸铅注射7次后，将动物随机分成两组:NRG1 ^ I处理组和对照组。各组动物自由觅食、饮水。 [0020]2、试剂配制 [0021]人NRGl ^ I (R&D公司)。NRGl ^ I或生理盐水通过腹腔注射治疗14天(50纳克/公斤/天，溶解在0.9%NaCl，称为载体处理组)。 [0022]3、组织制备，免疫组化 [0023]动物深度麻醉，灌注0.9%生理盐水，然后4%冰冷的多聚甲醛(pH7.4)。取脑后固定，20%和30%蔗糖脱水。在冷冻切片机冠状切片，厚度20 u m。 [0024]免疫荧光染色，兔抗ErbB4孵育(1:300稀释，细胞信号公司，美国)，小鼠抗GFAP(1:800稀释，Sigma公司)，小鼠抗CDllb (1:1000稀释，Sigma公司)，小鼠抗Bcl_2抗体(I: 500稀释,Sigma公司),小鼠抗Bax抗体(1:1000稀释,Sigma公司),4°C过夜,然后AlexaFluor488标记的驴抗兔IgG抗体和Alexa594驴抗小鼠IgG抗体标记的二抗室温孵育I小时。进行显微图像观察及细胞计数。每只小鼠选取海马切片各3张作为观察对象，对额叶皮层选取3个视野。分析系统对阳性细胞数进行定量测定。[0025]4、C0X_2ELISA 检测 [0026]C0X-2ELISA试剂盒购自于上海雅吉公司，加不同浓度梯度的标准品和待测样品，随后加辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体37 °C 60min,弃上清，冲洗，加底物A和B，370C lOmin，加反应终止液，450nm波长测定各孔的OD值。根据标准曲线计算待测样本的C0X-2浓度。 [0027]5、Morris水迷宫行为测试 [0028]Morris水迷宫水槽由一个直径120cm、高55cm的圆形水池组成，内壁被漆成黑色，水深41cm，水温24±2°C，池壁上由4个等距离点将池分为4个象限，逃避平台(直径6cm)置于其中一个象限，水面高出平台lcm。水池周围参照物在进行水迷宫试验的几天时间内位置保持不变作为空间参照线索。小鼠运动轨迹由迷宫上方连接于显示系统的摄像机采集。 [0029]Morris水迷宫实验程序包括:(I)定向航行实验(place navigation task):用于测量小鼠对水迷宫学习和记忆的能力。实验历时5d，每天分上、下午2个时段，每时段训练4次。训练时从一个象限开始，按逆时针方向，将小鼠从各象限边缘中点位置面向池壁放入水中，观察并记录在60s内找到平台的时间(逃避潜伏期,escape latency)。如果小鼠在60s内未能找到平台，用棒将其引上平台，并让其休息10s，潜伏期记为60s。(2)空间探索实验(spatial probe test):用于测量小鼠学会寻找平台后,对平台空间位置记忆的能力。撤除平台，然后任选一个入水点将小鼠面向池壁放入水中，记录60s内动物穿越目标平台(原平台位置)次数。 [0030]6、统计分析 [0031]所有的数据被表示为均数土标准差，用SPSS统计软件进行分析处理，组间比较用t检验(两组间比较)。定向航行试验逃避潜伏期的测量结果使用完全随机设计的方差分析和重复测量数据的多因素方差分析；空间探索试验结果使用完全随机设计的方差分析。P〈0.05为差异有统计学意义。 [0032]二、结果 [0033]( I) NRGl对小胶质细胞数量的影响 [0034]⑶Ilb是小胶质细胞的标记物，免疫组织化学计数检测显示，与对照组相比，NRGl处理组小鼠脑内⑶Ilb阳性细胞数显著减少，差异有统计学意义(见表1)。 [0035]表1CDllb阳性细胞计数的变化(J±^，单位:个/视野) 【权利要求】 1.神经调节蛋白I的用途，其特征在于:神经调节蛋白I在制备治疗重金属中毒性脑病药物方面的应用。 2.神经调节蛋白I的用途，其特征在于:神经调节蛋白I在制备减少脑内小胶质细胞数量的药物方面的应用。 3.神经调节蛋白I的用途，其特征在于:神经调节蛋白I在制备减少脑内星形胶质细胞数量的药物方面的应用。 4.神经调节蛋白I的用途，其特征在于:神经调节蛋白I在制备降低炎症细胞因子C0X-2表达水平的药物方面的应用。 5.神经调节蛋白I的用途，其特征在于:神经调节蛋白I在制备增加ErbB4阳性细胞数量的药物方面的应用。 6.神经调节蛋白I的用途，其特征在于:神经调节蛋白I在制备提高抗凋亡蛋白Bcl-2抑制凋亡活性的药物方面的应用。 7.神经调节蛋白I的用途，其特征在于:神经调节蛋白I在制备降低促凋亡蛋白Bax表达水平的药物方面的应用。 8.神经调节蛋白I的用途，其特征在于:神经调节蛋白I在制备改善学习与记忆能力障碍的药物方面的应用。 【文档编号】A61P39/02GK103611153SQ201310695683 【公开日】2014年3月5日 申请日期:2013年12月16日 优先权日:2013年12月16日  【发明者】杨彩玲, 邓晓慧, 毕凌云, 宋海岩, 孙春莉 申请人:新乡医学院。