小鼠阴道涂片方法

一、实验目的

1．了解啮齿类实验动物动情周期的检查法。

2．掌握动情周期各期的变化规律。

3．进一步熟练实验小鼠的抓取、固定等操作。

二、实验器材

1．棉签4只，载玻片4块，滴管2支，记号笔1支，染色炭1块。

2．95％酒精(或10％福尔马林)，0.9％生理盐水，0.23％碱性美蓝溶液(或苏木素伊红溶液)。

3．普通生物显微镜1台。

4．雌性小鼠2只。

三、实验方法

啮齿类成年雌性动物生殖器官表现出周期性变化的过程称为动情周期。小鼠动情周期一般分为五期，即动情前期(proostrus)0.5～1.5d，动情期(estrus)1～3d后，后情一、二期(metestrus I、Ⅱ)1～5d和间情期(diesus)2～4d。动情前期和动情期是生殖器官增殖时期，这一时期可以接受交配排卵而致受精，后情一、二期是生殖管道退化破坏期，间情期则是相对静止和缓慢生长期。

生殖生理和计划生育等课题的研究中，常常需要知道动物动情周期的情况，怎样才能知道动情周期的各个期呢?实验室常用阴道涂片法来达到这个目的。

1．阴道涂片法

阴道涂片法I：先将动物用记号笔标号，然后抓取并固定动物在手心，用细棉签在生理盐水中润湿后轻轻插入阴道约0.5cm，并慢慢转动一下取出，将棉签上的阴道内含物均匀地涂在载玻片上，玻片编号后自然干燥，95％酒精溶液(或10％福尔马林溶液)中固定10min后，在0.23％碱性美蓝(或苏木素-伊红)中染色5min，取出用自来水顺载玻片边缘慢慢冲洗小鼠阴道涂片上多余染液，风干后观察。

阴道涂片法Ⅱ：以左手拇指和食指捏住尾巴，其余三指轻压其后腰背部，翻起尾巴露出阴道口(图2-5)，先可初步观察外阴变化，然后右手持滴管，少许生理盐水滴入阴道口，当稍放松尾部及腰部时，生理盐水即被吸入阴道，然后三指轻压腰部，生理盐水即流出，吸入滴管并滴到标准的玻片上。下面的步骤同上法。

图2-5  小鼠阴道涂片采样法

2．小鼠动情周期阴道涂片的细胞变化特点

阴道涂片上可见到三种主要的细胞成分：①白细胞：在小鼠染色的标本上显得最小，在美蓝或苏木素红染色片上可辨认出染色的多形核白细胞；②角化细胞：在涂片上是更大的细胞，扁而多角形，没有核或有一小核；③有核上皮，是最标准的上皮细胞，呈圆、卵圆或多边形，有清晰的细胞质，嗜碱性，核染色深，位于细胞的中间。

各期上皮细胞的变化特点：

(1)间情期：细胞少而皱缩，全是有核上皮细胞，偶见少量角化细胞。

(2)动情前期：上皮细胞明显减少，主要是嗜碱性或失去着色能力的细胞，有的细胞形似蝌蚪，细胞质染色不均或有空泡，另加有少量有棱角化细胞及白细胞。

(3)动情期：几乎全是无核的角化细胞，染成红色，没有白细胞。

(4)后情一期：出现成团块或成片的角化细胞，有时有极少量的白细胞。

(5)后情二期：角化细胞减少，出现有核上皮细胞，白细胞增多。