实验样品采集运输保存方法

1. RNA 实验样品采集、保存方法 1.1 使用范围及样品量 类别：Microarray Service；Sequencing Service; PCR Array& PCR Service 样本量： 样本 动物组织样品 哺乳动物培养细胞样品（悬浮细胞） 哺乳动物培养细胞样品（贴壁细胞） 植物组织样品 样本量 50-100mg 1*107 个 15cm2 100mg-1g，根据植物不同部位的组织决定组 织需要量，尽可能多些，但不必超过 1g 1.2 动物组织样品 1.2.1 新鲜组织样品 A. 使用 RNAlater 试剂 取新鲜组织（注：动物死亡后尽快在 10min 内取材） ，组织块以 PBS 或生理盐水清洗干 净，所用组织必须切至厚度在 0.5cm 一下，然后放入装有 5 倍体积 RNAlater 的离心管（或 冻存管）中。 4 度孵育过夜，此时样品管需要横臵以便组织块充分接触到 RNAlater，然后转入-20 中 保存，样品在-20 不会冻结，但溶液中可能会有一些晶体出现，这并不影响后续的 RNA 抽 提。 B. 使用 Trizol 试剂 取新鲜组织（1min 以内） ，组织块以 PBS 或生理盐水清洗干净，每 50-100mg 组织加入 1ml Trizol 溶液匀浆裂解组织样品，最好冰上进行操作。 匀浆的裂解液 4 度短期保存（1month） ，-20 或者-70 度长期保存。 1.2.2 冻存组织 生物体死亡后尽快（10min 以内）切取新鲜组织，并以 PBS 或生理盐水清洗干净切成小 块；培养液倒入离心管中，离心沉淀细胞，弃去上清液。 细胞沉淀（1*107 个）中加入 1ml Trizol 裂解液 反复吸打几次后，目视可见细胞层溶液完全 -70 保存

1.3 贴壁细胞 从培养容器中吸出并弃去培养液 培养瓶直接加入 Trizol 试剂， Trizol 用量与细胞贴壁面积有关， 15cm2 细胞贴壁面积加入 1mlTrizol。 反复吸打几次后，目视可见细胞层溶解完全。 -70 度保存。 1.4 植物组织样品 准确取得所需新鲜组织后，如有必要可用 PBS 清洗干净，将所用组织切碎，装入冻存 管中或者用锡箔包裹好。 立即投入液氮中保存。

2.血液类样品采集、保存方法 2.1 适用范围及样品量 全血/血细胞：Microarray Service；Sequencing Service; PCR Array& PCR Service 血清/血浆：Microarray Service；PCR Array& PCR Service 样本量 样本 全血 血浆 血清 样本量 1-2ml （即每份样品 2-4 管） 1-2ml （即每份样品 2-4 管） 1-2ml （即每份样品 2-4 管）

在样品保存及转移过程中，应避免反复冻融样品 一般建议用新鲜的血液标本进行试验， 如果标本已经保存较长时间， 请先联系技术部门 确认样本是否适合进行实验。 2.2 全血 采集好全血，转移至单独的冻存管中，按照每 400-500ul/管分装。 短期保存可以再-20 度或者-70 度冰箱；长期保存放入液氮。 2.3 血浆 使用抗凝管采集全血，并尽快进行血浆分离：1000g 离心 10min，分离血浆和细胞组分 （抗凝剂一定不能是肝素）

将采集好的血浆转移至单独的冻存管中，按照每 400-500ul/管分装。 短期保存可以再-20 度或者-70 度冰箱；长期保存放入液氮。 2.4 血清 使用凝血管采集全血，采血后两小时内分离血清； 采血后轻轻倒转采血管混合 4-5 次，直立臵于室温待血液完全凝固，1000g 离心 10min， 分离血清。 将采集好的血清转移至单独的冻存管，按照每 400-500ul/管分装。 短期保存可以再-20 度或者-70 度冰箱；长期保存放入液氮。 2.5 从全血中提取白细胞 2.5.1 抗凝血收集 取无菌的 15ml 离心管一只，首先用 EDTA 或者柠檬酸钠溶液充分吹打管壁，使离心管 壁完全接触到该溶液，而后在管底留下少许该溶液（200ul 左右）收集 5ml 全血后迅速用枪 混匀或用手指拨动离心管底部混匀。防止部分血液凝固。 2.5.2 全血白细胞分离（以 3ml 抗凝血为例说明） 向一只 15ml 离心管中加入 3ml 抗凝血，而后加入 9ml 红细胞裂解液。盖紧管盖，温柔 的颠倒混匀数下，不要剧烈震荡 将离心管臵于室温放臵 10min 将离心管以 2500g 离心 5min 弃上清，尽可能将上清吸净，勿吸到管底白色斑块细胞 弃去上清后在管底出现可见的白色斑块， 此斑块为富集的白细胞。 如果裂解不完全加入 1mlPBS 缓冲液重悬，然后重复第一步 充分裂解后，加入 1mlPBS 缓冲液清洗一次 2500g 离心 5min 弃上清，可获得血液样品中全部白细胞的 80%以上，而后可加入适量的 Trizol，用移液 枪充分吹打，混匀，直至出现清亮不粘稠的液体。 而后可以将以上的 Trizol 试剂存在生物冰（0-4 度）寄送，或者直接干冰寄送。

3.DNA 实验样品采集、保存方法 3.1 适用范围及样品量 适用范围：Microarray Service；Sequencing Service; PCR Service

样品量 样本 细胞 组织 3.2 悬浮细胞 约 1*107 个细胞，低速离心收集，弃去培养液； 加入 2-5ml PBS 悬浮细胞，转入小离心管中； 低速离心沉淀细胞，弃去 PBS； 放入-70 度冰箱保存。 对于 ChIP-chip 实验为了获得理想结果，建议根据下述方法处理及保存悬浮细胞样品 取 107 个悬浮细胞低速离心，用 10ml 培养基将细胞沉淀重悬于 50ml 离心管中； 加入 270ul 37%的甲醛，轻轻混匀，室温孵育 10min；该步骤最好在通风橱完成 加入 1ml 1.25M 的甘氨酸，轻轻混匀，室温孵育 5min，中和甲醛； 2000g 离心 5min，弃上清，用预冷的 PBS/EDTA 洗细胞两遍 2000g 离心 5min，弃上清； 收集到的样品-80 度冻存。 3.3 贴壁细胞 约 1*107 个贴壁细胞，胰酶消化； 加入 PBS 悬浮细胞，低速离心收集，弃去液体； 加入 2-5 ml PBS 悬浮细胞，转入小离心管中； 低速离心沉淀细胞，弃去 PBS 放入-70 度冰箱保存。 对于 ChIP-chip 实验为了获得理想结果，建议根据下述方法处理及保存贴壁细胞样品 3.4 组织 采集新鲜组织（生物体死亡后 10min 内取材并保存好） 组织块以 PBS 或生理盐水清洗干净，切为小块 放入液氮或-70 度冰箱保存 样本量 1*107 个 50-100mg

4.蛋白实验样品采集、保存方法

4.1 适用范围及样品量 适用范围：Microarray Service Other Service 样本量： 样本 血清和血浆 细胞 组织 4.2 血清和血浆 采集新鲜血液，分离血清或血浆，放入-20 度或者-70 度冰箱保存 4.3 悬浮细胞 约 1*107 个细胞，低速离心收集，弃去培养液； 加入 2-5ml PBS 悬浮细胞，转入小离心管中； 低速离心沉淀细胞，弃去 PBS； 放入-70 度冰箱保存。 4.4 贴壁细胞 约 1*107 个贴壁细胞，胰酶消化； 加入 PBS 悬浮细胞，低速离心收集，弃去液体； 加入 2-5 ml PBS 悬浮细胞，转入小离心管中； 低速离心沉淀细胞，弃去 PBS 放入-70 度冰箱保存。 4.5 组织 采集新鲜组织（生物体死亡后 10min 内取材并保存好） 组织块以 PBS 或生理盐水清洗干净，切为小块 放入液氮或-70 度冰箱保存 样本量 100-200ul 107 个 50-100mg

5. 样品保存和运输 5.1 注意事项 将收集的各类样品用冻存管或离心管装好，保存在低温冰箱或者液氮中。 所使用的 1.5ml 冻存管或离心管、枪头等必须高温灭菌处理，装好样品后管口需要以封

口膜封好。 注意已保存的样品不要反复冻融。 5.2 干冰运输 根据干冰量准备大小适当的泡沫盒，在其中放入干冰（需要 10 公斤，至少为 8 公斤） 和标本（用塑料袋或者塑胶手套装好） ，盒子内的空隙用旧报纸塞满，以防干冰挥发后有液 体流出。 泡沫盒须选择较厚的，以免在运输过程中破碎导致样品丢失，分别用封箱带密封。最后 在外面套上一个纸盒子，也要用胶带密封。 5.3 冰袋运输 保存在 RNAlater 中的组织样本； 保存于 Trizol 中的细胞样本或经过匀浆的组织样本在短期（5 day）可使用冰袋运输。 5.4 液氮运输 冻存组织需要干冰或液氮运输。液氮无法快递，适合市内运输。 5.5 常温运输 本市内细胞样品也可以直接常温运送，运送时在培养瓶中装满培养液并以封口膜封口， 然而某些实验条件中包含时间限制，建议冻存后运输。 5.6 样品运输注意事项 打包好的样品交于快递公司，不提及干冰等字样 快递寄出，将快递单号告知销售，以便跟踪快递进程 务必在周日、周一、周二寄出快递，以免到达上海的时间是周末，公司无法查收。