外泌体是细胞分泌的大小约为30-200nm的纳米物质，是细胞外囊泡的一类，结构类似于细胞，磷脂双分子层表面具有多种特异性膜蛋白，内部携带着多种蛋白质、RNA、DNA等重要生物信号物质，广泛分布于血液、尿液、脑脊液、唾液、乳汁、胆汁等各种体液中。
外泌体与标志物研究
外泌体由细胞主动分泌并可将源自亲本细胞的大量生物分子运载至其他细胞，与疾病的发病机制密切相关，特别是肿瘤疾病。目前，虽然组织活检仍然是肿瘤诊断的金标准，但其具有侵入性和组织样本的局限性。因此，外泌体研究作为一种微创手段，可体现整体分子信息且可反复取样进行大规模监测，用于疾病诊治具有显著的优势。目前高效且可重复好的外泌体精准分离和成分分析方法在外泌体标志物研究层面还是面临了一定挑战。
一、外泌体蛋白标志物研究
外泌体蛋白由于其独特的优势在标志物研究中备受推崇：（1）外泌体蛋白在外泌体中稳定，半衰期长。（2）外泌体蛋白可以直接作用于靶细胞，而核酸在发挥活性之前必须经过转录或翻译。（3）外泌体蛋白可以提供丰富、稳定、敏感的和独特的信息，检测到外泌体表面蛋白质标志物可能更利于后期临床转化。（4）由于基于质谱法检测技术的进步以及数据收集和分析方法的不断优化，蛋白质组学的蛋白质覆盖率和灵敏度有所提高。
外泌体蛋白质标志物的研究，对外泌体分离的质量要求极高，依照现阶段技术提取的外泌体蛋白质往往携带污染蛋白。血浆/血清样本是主要研究载体，然而，血浆/血清中含有大量的载脂蛋白，如高密度脂蛋白质HDL，低密度脂蛋白质LDL，极低密度脂蛋白VLDL，乳糜微粒CM等。外泌体与这些脂蛋白质在物化性质上具有较大的相似性。常规的外泌体分离方法，如超速离心和沉淀法等都无法有效去除血浆/血清中的脂蛋白，严重干扰了下游质谱实验数据的检出率和可靠性。同时，实验样本来之不易，如何尽可能利用更少的样本获得更可靠的实验数据，成为外泌体蛋白质组学研究科研群体共同面对的技术问题，限制了外泌体蛋白质标志物研究的推进和临床转化。
华盈生物开发了一套完整的外泌体蛋白质组学研究技术服务体系，对蛋白质组学实验前处理进行了系统性创新优化，将样本用量降低的同时获取高质量数据，如利用0.5mL血浆即可完成外泌体的分离与蛋白质组筛选工作。在样本使用量和检出蛋白数上，华盈生物的技术平台不断冲击外泌体蛋白质组学的检测的上限。
二、外泌体核酸标志物研究
目前液体活检领域的手段主要包括ctDNA、CTC、外泌体，以及细胞外游离核酸（RNA和DNA）。外泌体由于其结构特征能很好的保持内部核酸分子的稳定性，其核酸分子作为各种类型疾病的生物标志物已成为疾病研究和转化的关注点。对外泌体中的长链RNAs进行全转录组测序分析，一次测序实验，即可以获得上万条长链RNAs的检测数据，全面覆盖 mRNA、lncRNA和 circRNA等长链RNAs。外泌体全转录组测序数据量大、信息全面，是发现特异性疾病诊断标志物、进行多组学分析的重要手段。华盈生物外泌体全转录组测序服务体系，充分结合了专利微量核酸建库技术、NGS技术和全新的生物信息序列比对算法，可对血浆中外泌体的mRNA、lncRNA和circRNA 等RNAs进行充分捕获和测序，可以实现从1mL血浆分离的外泌体中，稳定检出超过1万条长链RNAs。
外泌体中的miRNA具备广泛的生物活性，可参与机体免疫应答、抗原呈递、细胞分化、肿瘤生长于侵袭等多种生物过程。然而，外泌体中的miRNA虽然种类较多，但其丰度并不高，这就对外泌体miRNA检测技术的灵敏度和准确性提出了挑战。为有效解决外泌体miRNA筛选与检测的难点问题，华盈生物引进了先进的单分子标签(Unique Molecular Identifier，UMI)微量建库测序技术。UMI建库不仅显著提高了外泌体miRNA检测的准确性，也提高了其检测的灵敏度，降低了RNA样本用量（1-5ng即可完成建库测序），非常适合外泌体miRNA这种微量样本的测序研究。
在外泌体验证阶段，华盈生物将根据不同的数据测序结果为用户提出有针对性验证策略和具体实施细则，结合华盈生物拥有的RT-PCR和数字PCR双平台的硬件设施支撑，可以为广大外泌体研究人员提供高品质的数据保障。
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