HCP 又称宿主细胞蛋白,是生物制品的关键质量属性(CQA),直接影响着生物制品的安全性,有效性和稳定性。因此,在整个生物制品的生产环节中,我们需要使用浑身解数将 HCP 去除或者达到可控制的足够低的水平。目前,夹心 ELISA 是检测 HCP 残留的金标准。
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见证奇迹的时刻来了
HCP 定量检测试剂盒
Amersham™ HCPQuant CHO 试剂盒是由 GE 医疗生命科学部 (GE Healthcare Life Sciences) 和 Rockland Immunochemicals, Inc. 合作开发,并得到了广泛验证。这款试剂盒旨在对由中国仓鼠卵巢细胞 (CHO) K1 细胞系产生的生物制品的工艺过程中带来的宿主细胞蛋白 (HCP) 污染进行量化。Amersham HCPQuant CHO 含量测定分析增强了对宿主细胞蛋白的检测和定量,特别是对低分子量范围内的 CHO-HCP 蛋白具有较强的检测能力。
具体特点请听小编一一道来,请大家搬好小板凳做好哦~
特点一:HCP 抗体覆盖率高
众所周知,宿主蛋白 HCP 检测过程中,低分子量蛋白的检测是最困难的,Amersham HCPQuant CHO 能够检测 LMW 范围酸性和碱性蛋白中的 HCP,可提高试剂盒对于 HCP 的覆盖率。
实验基于具有荧光的 2D DIBE™ 技术。CHO HCP 标准品(包含在试剂盒中)用 CyDye™DIGE Cy™3 预标记,然后使用 7 cm IPG 条带通过 2D 电泳法分离。将蛋白转移到 PVDF 膜上,使用生物素化的抗 CHO 型 HCP 抗体进行探测。采用链霉菌素 Cy5 复合物进行检测。将膜放置于 Amersham™ Typhoon 上进行扫描,并使用 Melanie™ 9 计算覆盖率。
覆盖率为 95%,LMW 蛋白的覆盖率在 89% 至 93% 之间的范围内(图 2)。
图 2
表 1. 象限分析情况(使用 2D DIBE 技术在 Amersham Typhoon (25 µm) 上进行扫描并用 Melanie 9 覆盖软件分析)。
表 1
图 3. 使用 Melanie 9.2 覆盖软件进行覆盖分析
特点二:动态范围宽
Amersham HCPQuant 动态范围宽,可减少线性实验所需的时间和板的数量。
采用 CHO K1 细胞裂解物进行线性测定分析,标准曲线显示范围广 (2-200 ng/mL),线性度强,R²=0.998(图 4)。
图 4. 标准曲线
特点三:灵敏度高
通过 8 次重复测量,得到了 LLD 检测下限和 LLQ 定量下限,分别是 LLD=2ng/ml, LLQ=4ng/ml。
特点四:重复性好
采用添加三种不同样品浓度(低、中、高)进行精密度测定,每一种浓度进行 25 次重复试验,计算板内和板间的精密度,可以看到重复性很高,满足检测行业的质控标准。
此外,GE 还提供一整套设备和耗材,帮助大家进行覆盖率测定,DIBE 系统具有极好的重复性和稳定性,更多信息,欢迎留言~
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