【技术专题】Western Blot实验操作及选购指南-3

“

转膜

”

转膜是将蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶转移到膜上的过程。转膜的方法可分为半干转和湿转，湿转法转膜效率较高，使用转膜液多，转膜时需要冷却，半干转转膜时间短，需要的转膜液少，不适合转移高分子量蛋白质。

印记膜可以选择PVDF膜和NC膜。PVDF膜与目的蛋白结合能力较高，灵敏度高，不易破碎，可适用于再次标记（使用前需要浸泡在甲醇中激活）。NC膜不需要甲醇激活但易破碎。膜的规格有0.45 μm和0.2 μm两个规格，大于20 kD的蛋白可用0.45 μm的膜，小于20 kD的蛋白要用0.2 μm的膜。

生工相关产品——印记膜

PVDF膜湿转步骤

1. 准备好转膜液，将胶浸于转膜缓冲液10 min左右。

2. 根据胶的大小剪PVDF膜（使用前需要用甲醇处理）和滤纸，放到转膜缓冲液中平衡10 min左右。

3. 装配转膜，在海绵上放置3层已经用转膜液浸泡过的滤纸，放置胶，放置处理好的PVDF膜，放置3层已经用转膜液浸泡过的滤纸，放置海绵，注意每层之间都不能有气泡，用转膜仪中的支架夹住。（胶位于负极）

   

4. 将转膜“三明治”放置到转膜槽中，加转膜缓冲液，将转移槽置于冰浴中。插上电极，根据蛋白分子量确认转膜的电压/电流，时间。

5. 转膜结束后，切断电源，取出PVDF膜。转膜后可能分不清膜的方向，可在膜上剪角，有利于判断膜的方向。

生工相关产品——转膜缓冲液