11
外显子捕获效率是什么？
外显子测序过程中要用到杂交过程。在人的染色体上有许多与外显子有同源性的部分，这些有同源性的部分很可能在杂交过程中也被捕获下来。所以，测到的序列中，有一部分不是外显子序列。我们把测序得是外显子的部分占全部测序序列的比列称为捕获效率。捕获效率的高低不影响数据质量，只影响数据的有效比例。
12
何时选择全外显子捕获？何时选择定制探针捕获？
人类和一些常见物种的全外显子捕获都有预设的探针产品，其中人类全外显子探针已优化过多个版本。如果目标区域很多且均为外显子（几十Mb以上），建议直接选择全外显子捕获，因为全外显子有设计更成熟的探针组和更低的成本，捕获效果更好。对于较小的目的片段，或者也关注外显子以外的区段，建议采用定制探针。
13
定制设计外显子捕获探针需要提供什么信息？
物种、参考基因组信息、目标区域信息（坐标、基因名字或基因编号等），由欧易技术人员完成设计。如只提供坐标信息，应使用表格的形式提供。如提供基因名字，最好是NCBI 的正式名称，有对应的基因编号。提供的多个目标区域允许重叠，不影响后续的设计和分析。在设计完成后会将最终的区域信息反馈给客户确认，目标区域最大支持200Mb（合并计算后）。提供基因名字后，欧易技术人员可以帮客户找到基因的特定区域，如外显子、UTR 等。如果要求捕获其中的几类或者全部，需要注明。
14
常规物种、物种基因组较新、不完善或者错误较多能不能做外显子捕获测序？
可以，捕获测序平台没有种属限制，只需要提供基因组序列信息以及目标区域信息即可。即使物种的参考基因组比较新、不够准确的、甚至是差别非常大，也可以进行捕获测序设计。但相应地，捕获的探针是根据客户提供的序列来设计的，因此不能完全保证结果的准确性。
15
降解样本是否能开展后期建库？对于后续数据及分析有哪些影响？
样本降解非常严重，不建议风险建库，建库成功率低； 样本严重降解若构建人外显子文库的影响主要是捕获效率会偏低，有效数据量偏低，properly mapped偏低。
16
样品粘稠、胶孔杂质污染及RNA污染对建库有何影响？建库成功率大概是多少?
轻微的蛋白污染对建库影响较小，但是如果蛋白戒其他杂质污染严重，一是会影响定量，二是会影响建库中酶效率，使建库成功率降低； RNA污染主要影响样本定量及建库中DNA的分选；所以存在RNA污染，在样本总量及质量合适情况下建议进行RNA消化；
17
一块组织能够进行DNA和RNA共提取吗？提取方法是什么？
可以进行共提取；共提取方法一般有两种，一种是将组织切割分为两部分，各进行DNA和RNA的提取；另一种为使用DNA/RNA共提取试剂盒提取，但是一般提取后特别容易造成DNA及RNA 的降解。
18
FFPE样品DNA提取得率低的原因是什么？
FFPE样品一般为存放多年的样本，本身已经由于甲醛作用降解严重；且FFPE样本一般比较珍贵，老师送样量较少。
19
cfDNA与ctDNA的区别何在？
cfDNA（cell free DNA）是在血液中游离的DNA，是身体正常细胞戒者白血球破裂释放出来的，对身体无害，不久便会被自身清理； ctDNA为(circulating tumor DNA): 是肿瘤细胞破裂释放到血液中的游离DNA，可作为一种高特异性的肿瘤标志物。
20
提取cf/ctDNA时血浆样本分离方法？
采集外周血5 mL（采血时间一般为早晨或上午），迅速转入EDTA抗凝管中，小心颠倒混匀（防止溶血）；在1小时（室温条件下）或2小时（4℃条件下）内分离血浆：4℃， 1000 rpm离心10分钟，小心吸取血浆转至洁净的1.5mL EP管中（吸取血浆过程中注意不要吸到白细胞），然后12,000rpm，4℃离心10分钟，去除残余的细胞或碎片，小心吸取所需上清体积到新的分装EP管中，用油性marker笔标记，放入-80℃超低冰箱中保存，避免反复冻融，干冰运输送样。
联系客服
