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基因工程及其应用
基因工程:
即基因拼接技术或DNA重组技术。通俗的说,就是按照人们的意愿,把一种生物的某种基因提取出来,加以修饰改造,然后放到另一种生物的细胞里,定向地改造生物的遗传性状。
原理:基因重组
操作水平:DNA分子水平
结果:定向地改造生物的遗传性状,获得人类所需要的品种。
限制性核酸内切酶
特点:一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列,并在特定位点切割
结果:产生黏性未端(碱基互补配对)。
举例: 大肠杆菌的一种EcoRI限制酶识别GAATTC序列,并在G和A之间切开)。
DNA连接酶
作用:将互补配对的两个黏性末端连接起来,使之成为一个完整的DNA分子。
条件:
1、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存
2、具有多个限制酶切点(每种限制酶切点最好只有一个),以便与外源基因连接
3、具有标记基因,便于进行筛选
常用的运载体:
质粒、噬菌体和动植物病毒等,都有侵染或进入宿主细胞的能力
质粒是拟核或细胞核外能够自主复制的很小的环状DNA分子.
第一步:提取目的基因
注意:要保持基因的完整性
第二步:目的基因与运载体结合
注意:要用同一种限制酶切取目的基因和运载体,并用DNA连接酶连接。
第三步:将目的基因导入受体细胞
常用微生物作受体细胞,因为微生物增殖快、代谢快、目的产物多
第四步:目的基因的检测和表达
检测标记基因是否表达
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