1.提取Trim 23敲降后的样品(5种,每种3个),并计算浓度。2.RNA上样量为2 μg(=2000ng),2000/样品浓度=上样体积,12-上样体积为水的上样量。
3.取RNA样品置于冰上,将8联EP管置于低温金属孔板上,在EP管瓶盖上标记反应样品名称。
4.先按计算的上样量水加水(不换枪头),再加入RNA样品(每个都要换枪头)
5.在每个反应管中加入 Ologo(dT)18 Primer 1 μL(每个都要换枪头)
6.振荡(轻柔),离心
7.上PCR仪,压紧反应管,选择RT 1预设程序,13 μL体系
配制反应体系容量=单个反应体系×数量×110%
具体单个反应体系为7μL:
RRI M-MLVRT dNTP M-MLV Buffer(5×)
0.5 μL 0.5 μL 2 μL 4 μL
8.将第一步反应完成样品取出,放置于冰上,冷却5分钟。
9.在反应管中加入反应体系7 μL,振荡(轻柔)离心。
10.上PCR仪,选择RT 2预设程序,20 μL反应体系
本站仅提供存储服务,所有内容均由用户发布,如发现有害或侵权内容,请
点击举报。