1.规划实验方案,每个引物通常设3 个孔(熟练后可以2 个孔,当然3 个最好),作为重复对照。
2.配制引物体系,单孔的引物配比为:上游引物0.2μL,下游引物0.2μL,水3.6μL。每种引物的反应总容量=CDNA模板数量×重复次数(复孔数量)×110%
3.配制模板体系:单孔加样=cDNA1μl+染料5μL(小蓝瓶装),总量为引物组数×引物重复次数×110%。
4.将8 联装反应管纵向排布在 低温金属板的孔位上,左→右标记1-12,上→下标记1-8,每2 排划线标记,防止加错样品
5.将样品加入反应管,顺序为横向加样,注意调出空白隔离孔,防止加错,引物设置几组(比如3组)重复就加几个(横向加3个样品)
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