细胞状态不好？细胞反复污染？怎么办？

细胞污染怎么办？

细胞污染类型

化学污染物：培养基、血清、水中的杂质、内毒素、增塑剂、去污剂等

生物污染物：

细菌污染

真菌污染

支原体污染

细胞来源不明、耗材重复利用、试剂公用、同时操作多种细胞、标记失误造成细胞的交叉污染，抑制原细胞的增殖。

交叉污染

关于污染源

· 环境：水浴锅、培养箱水盘、细胞培养培养内壁、超净台、桌面及试剂瓶身、细胞房空气消毒；

· 操作：细胞复苏、传代、冻存等过程中也可带入污染；

· 试剂：血清、基础培养基、胰酶、辅助试剂、营养添加物等；

· 耗材：培养皿或培养瓶、枪头；

· 细胞：本身携带污染、细胞老化、分化等。

如何进行污染源排查

可通过控制变量法对整个培养操作流程进行分析：培养试剂及辅助试剂等条件不变，重新复苏一株细胞，观察细胞是否有污染现象。

· 血清：其他试剂保持不变，仅更换血清；

· 基础培养基：其他试剂保持不变，仅更换基础培养基；

· PBS：其他试剂保持不变，仅更换PBS；

· 胰酶：若细胞复苏很好，一传代就污染，可以尝试其他试剂保持不变，更换消化用胰酶；

看细胞状态，细胞反复复苏都会出现污染，那可保持培养体系不变，培养其他类型且适用于此培养体系的细胞，观察是否有污染出现。整个培养体系，基础培养基、血清、营养添加物都可使用控制变量法进行排查。

其次，细胞间一旦发生污染，除了及时将细胞按照适当的方法处理外，还应当及时将细胞培养箱、细胞房等做好清洁和消杀，预防细胞污染问题反复。 

备注：

空培不能用于污染来源排查：分别空培胰酶、PBS、冻存液、高压水；空培血清时，因为血清中富含蛋白，空培过程中会有沉淀产生；空培完全培养液（血清+基础培养基）时，若完全培养基培养后有污染出现，也不好判断是血清还是基础培养基，或者是操作过程中带入的污染。

消杀Tips

恒温培养箱消毒方案

清理细胞后:

1、 先用75%酒精擦拭细胞培养箱内壁，包括培养箱的平板、腔体以及储水槽；

2、 用蒸馏水将培养箱擦拭，避免高浓度酒精在腔体残留，且在后续的高温杀菌过程中腐蚀不锈钢腔体，损坏培养箱；

3、 启动培养箱自带高温消杀系统

4、 重新启用后，在后续的使用中注意培养箱滤膜的及时更换，储水槽最好使用灭菌后的蒸馏水，可加入少量硫酸铜预防污染；

细胞房空气消毒方案

细胞房地面消毒方案

最后，巧用抗生素，帮助预防污染~