CAPS试剂即环己胺丙磺酸,是一种氨基磺酸盐,具有两性,应用最广泛的就是在水性聚异氰酸酯涂料中以及HPLC分离、SDS-PAGE凝胶电泳等生化实验的生物缓冲液中。
作为生物缓冲液时,CAPS与Tris、MOPS类似,都可用于电泳缓冲液,但又有区别,我们可以先了解下电泳缓冲液的要求。电泳是指带电粒子在电场作用下,想着与其电性相反的电极移动,在确定条件下,带电粒子的移动速率(迁移率)固定。生化实验中,带电粒子通常是蛋白质胶粒、核酸等,不同的蛋白质或核酸迁移率不同,从而会相互分离。由于蛋白质和核酸颗粒对pH非常敏感,所以电泳液中必须加入缓冲剂来保护蛋白质或者核酸。
环己胺丙磺酸CAPS
在外加电场的电压固定和电泳时间等条件相同时,不同的电泳粒子迁移率不同,所以蛋白质或核酸的大小不同或种类不同,迁移率就不同。不同粒子的迁移率差值即分开距离与电压和电泳时间成正比。根据电泳粒子的大小不一,其使用的电泳缓冲液也不一样。
CAPS缓冲液:适用于高分子量的蛋白质(大于20KD)的电泳,即western blot。由于CAPS制成的电泳缓冲液中只含有EDTA、甲醇,蛋白质凝胶电泳PVDF不仅用于蛋白质的分离,也可以用于后续的蛋白质测序。
Tris缓冲液:通常用于核酸DNA的电泳,即Southern blot。其中TEA用于大于13kb的DNA片段,分离效果好,可用于回收DNA;TBA用于小于1kb的DNA片段,不过其中的硼酸会影响DNA回收及后续的酶反应实验。Tris也可以用于低分子量蛋白的印迹实验,不过要进行蛋白质测序时不能用带有甘氨酸,需要用Tris-Tricine+EDTA缓冲体系。
MOPS缓冲液:电泳时通常用于配制RNA电泳缓冲液,即Northern blot。
除了上述的CAPS、Tris、MOPS之外,还有一些其它的电泳缓冲液,在整个电印迹实验中,缓冲液的成本与核酸染料、蛋白质等比起来占比是较少的,建议使用优质的缓冲剂原料确保实验效果。
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