为肿瘤免疫治疗“量身打造”AAV载体，可有效提高抗原转染率

癌症是全球范围内引发死亡的主要原因之一。手术治疗、放射治疗和化学治疗被广泛应用于癌症患者的治疗，很大程度上效果可观，但是它们都会带来极其严重的副作用，并对已被癌症削弱的机体造成进一步伤害。因此，发展对肿瘤细胞具有选择性（特异性）细胞毒性、可有效控制肿瘤生、毒副作用少的替代性治疗变得十分必要。

对于目前使用的抗肿瘤疗法，免疫治疗是一种具有吸引力的替代选择。尽管我们观测到了患者体内自然发生的抗肿瘤免疫反应，但是这些反应仍无法控制肿瘤的生长。另一方面，在体外通过粒-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）和白细胞介素-4（IL-4）刺激下生成的由单核细胞细胞分化的树突状细胞（moDCs），能在内源性抗原表达后，激活抗原特异性T细胞。

因此，大量关于基因修饰树突状细胞的研究开展了起来，多项临床一、二期研究已经开始，用来评估基于DC细胞的疗法的有效性。

在人体内，DC接受、处理抗原信息，迁移至T细胞丰富的组织，通过主要组织相容性复合体（MHC）将抗原以抗原肽的形式提呈给T细胞，并伴随额外的刺激信号导致特异性T细胞的克隆增殖。在将DC应用于治疗时，相应的肿瘤特异性抗原应被有效传递至DC。尽管自2010年，FDA批准的第一例治疗性疫苗在治疗前列腺癌领域内带来极大的进展，但目前DC负载的方法在各方面仍有很多不足，如细胞活性、抗原递呈持续时间的不确定性以及部分患者基因表型导致的限制。

通过全长蛋白或者多肽将抗原加载到DC上，是DC递呈抗原常见的的方法。除此以外，裸露的或者脂类包裹的质粒DNA，以及裸露的RNA，可用于内源性抗原的表达。

基于病毒基因组的可修饰性以及病毒可有效感染多种细胞的天然能力，使科研人员更倾向于使用基于病毒的载体技术向DC递呈抗原表达信息，从而导致患者体内产生抗肿瘤免疫反应。

在多种病毒转导基因的方法中，基于人类的细小病毒——腺相关病毒（AAV）的载体备受关注，主要是由于其非致病性、对转染细胞无毒性，以及其可转导长片段基因、持续性的基因表达的能力。

AAV载体作为一种安全、有效的递呈载体已在多项临床试验中使用，例如B型血友病，帕金森病、肌无力和眼疾。

通过常见的血清型的AAV载体成功转染不同DC亚型的案例已有展示，也讨论过基于AAV的抗肿瘤疫苗的潜在优势

然而，在我们之前的研究中，已经很清楚，天然的AAV对于许多种细胞（包括DC）并不是最好的转到载体，通过修饰AAV的衣壳表面上暴露的氨基酸，如酪氨酸，丝氨酸或苏氨酸，可明显提高AAV转染DC的效率。

这些残基在AAV载体的胞内运输中起到重要的作用，因此他们可以通过广泛表达于多种细胞和组织内的细胞激酶被磷酸化，并提供泛素化和载体蛋白酶体介导降解的信号。

在这些研究的基础研发出的新的载体技术，能高效转染单核细胞来源的DC。该过程中的一个主要障碍，同时也是很重要的一点——由免疫竞争所诱导的针对载体和转基因抗原决定簇的细胞免疫反应，可以通过新的AAV载体克服，通过改造衣壳蛋白，使得病毒颗粒可以被宿主蛋白酶降解，从而减少递呈的物质。

总之，这些数据标明通过衣壳修饰的AAV载体高效转染单核细胞来源DC是确实可行的，为将来使用该载体研究人类DC疫苗的潜在效用提供的支持。然而，通过重组腺相关病毒载体向DC转导基因，就其在抗肿瘤疫苗中的特异性和转导效率方面，仍有很大的可改善的空间。

原文作者：Georgiy Aslanidi, PhD,Cellular and Molecular Therapy, University of Florida, USA

ACTL正是基于AAV载体技术而研发出来的抗肿瘤免疫治疗技术，AAV使得肿瘤相关抗原转染DC细胞的效率大大提升，从而确保了ACTL的疗效。