Worthington 胶原酶实用指南

胶原酶原料认证 ：

粗胶原酶制剂含有两种不同胶原酶的几种同工型，一种巯基蛋白酶、梭菌蛋白酶、一种胰蛋白酶样酶和一种氨肽酶。这种胶原蛋白水解和蛋白水解活性的组合可有效分解细胞间基质，这是组织解离的重要部分。该复合物的一个成分是水解酶，它优先在序列 Pro-Y-Gly-Pro 中的 Y-Gly 键处降解天然胶原蛋白中的螺旋区域，其中 Y 最常见的是中性氨基酸。这种切割产生对进一步肽酶消化敏感的产物。粗胶原酶被半胱氨酸、EDTA 或邻菲咯啉等金属螯合剂抑制，但 DFP 不抑制。它也被一种大的血浆糖蛋白α2-巨球蛋白抑制。钙2+是酶活性所必需的。

每种胶原酶的特定酶谱已与从中获得研究细胞的组织（或与放置细胞的用途）相关，并且作为相关性的结果，Worthington已经建立了几种类型的粗胶原酶：类型 1、2、3 和 4。

· 1 型粗胶原酶具有胶原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶和胰蛋白酶活性的原始平衡。

· 2 型含有较高相对水平的蛋白酶活性，尤其是梭菌蛋白酶。

· 3 型含有最低水平的二级蛋白酶。

· 4 型被设计成胰蛋白酶活性特别低，以限制对膜蛋白和受体的损害。

· 5 型 含有较高的胶原酶和酪蛋白酶值。

· 6 型 含有高胶原酶活性，酪蛋白酶与胶原酶的比例约为 2:1。设计为相对于 I 型 ( col  G)富含 II 型 ( col  H) 胶原酶。

· 7 型胶原酶和酪蛋白酶的活性比 1 型和 2 型胶原酶高四倍。

 ·纯化的胶原酶，代码：CLSPA，含有最少的二次蛋白水解活性和高胶原酶活性。

Worthington  预包装形式的每种类型的 0.22µm 过滤制剂，用于直接重组和用于细胞分离和培养程序。酶类型和不同组织的有效性之间的相关性很好，但并不完美，部分原因是使用的可变参数。然而，大多数研究人员认为粗胶原酶批次的组织分型是一项有价值的服务。

胶原酶测定是对Mandl的改进，其中胶原酶与天然胶原一起温育5小时并且使用Moore and Stein, JBC, 176 , 367, (1948)比色茚三酮法测定胶原分解的程度。释放的氨基酸以每毫克胶原酶微摩尔亮氨酸表示。

用途：粗胶原酶广泛用于酶促原代细胞分离和组织解离程序。大多数研究人员要么使用粗制胶原酶制剂，例如 1、2、3 和 4 型，要么使用色谱纯化的胶原酶（代码：CLSPA）；后者通常与二级酶如弹性蛋白酶、透明质酸酶等结合。为了获得最佳结果，必须针对要解离的组织调整蛋白水解活性的较精确混合。不同组织的类型和有效性之间的相关性很好，但并不完美，并且可能部分取决于使用参数和目标以及批次间的差异。

胶原蛋白 (CL)

脱氧核糖核酸酶 I (DP/D/DCLS/D2/DPFF/DPRF)

弹性蛋白酶 (ES/ESL/ESFF)

透明质酸酶 (HSE/HSEP)

中性蛋白酶 (Dispase, NPRO)

木瓜蛋白酶 (PAP/PAPL/PAP2)蛋白酶 K (PROK)

胰蛋白酶 (TL/TRL/TRL3/TRLS/TRTPCK)

胰蛋白酶抑制剂 (LBI/OI/SI/SIC)

细胞分离优化系统 (CIT)

肝细胞分离系统 (HIS)

新生儿心肌细胞分离系统 (NCIS)

木瓜蛋白酶解离系统 (PDS/PDS2)