Worthington 逆转录酶，重组 HIV解决方案

Worthington 脱氧核苷三磷酸：DNA 脱氧核苷酸转移酶（RNA 导向）

逆转录

5' → 3' 核酸外切酶活性

逆转录酶是在逆转录病毒病毒基因组中编码的酶。该酶负责病毒 RNA 的转录以产生可插入宿主基因组的 dsDNA。

逆转录酶是多功能酶。这些酶表现出 RNA 和 DNA 定向聚合酶活性。此外，逆转录酶催化 RNA-DNA 杂交体中 RNA 的降解。核酸外切活性沿 5' ---> 3' 方向进行。RNA 或 DNA 指导的活性需要模板（RNA 或 DNA）和引物。下面是反应的示意图：

Worthington重组大肠杆菌逆转录酶的特性：

重组 HIV 逆转录酶由异二聚体组成，亚基的分子量为 66,000 和 51,000 道尔顿（p66/p51 异二聚体）

在 pH 8 时获得最佳活性。需要 Mg ++离子和巯基试剂。对于 RNA 转录，需要 RNA 模板和脱氧寡核苷酸引物。引物可以是 oligo dT 8-12 或具有随机或特定序列的 DNA 的混合物。转录的所得 DNA 称为互补 DNA (cDNA)。逆转录酶表现出DNA定向的DNA聚合酶。这种活性缺乏通常与细菌 DNA 依赖性 DNA 聚合酶相关的 3' ---> 5' 核酸外切酶活性。

HIV 逆转录酶的第三种活性是 RNase H。RNase H 降解 RNA:DNA 杂合体中的 RNA。聚合酶和 RNase H 活性之间的结构-功能关系分析表明，这两种活性存在于分子的不同片段中。虽然聚合酶结构域包含在 NH 2 -末端 51KDa 中，但 RNase H 活性位于 COOH - p66 亚基的末端 15KDa 中。

Worthington 逆转录酶，重组 HIV的应用：

HIV逆转录酶用于艾滋病引物的研究。但是它可以替代AMV逆转录酶，后者主要用于将mRNA转录成双链cDNA，可以插入到原核载体中。该酶还可以与单链 DNA 或 RNA 模板一起使用，以制作用于杂交实验的探针。它可用于标记具有突出 5' 末端的 DNA 片段的末端。当大肠杆菌DNA 聚合酶 I 的 Klenow 片段或 T7 DNA 聚合酶产生不满意的结果时，该酶还可用于通过 Sanger 的双脱氧链终止方法对 DNA 进行测序。