Jackson荧光体研究丨Jackson荧光粉选择

荧光粉选择

荧光探针或荧光团（荧光染料或蛋白质）与二级抗体或链霉亲和素偶联，以使分析物可视化。每个荧光团都有自己的光谱特性，分子特有的激发光谱和发射光谱。Jackson荧光有助于多种技术同时检测多种分析物，包括流式细胞术、荧光显微镜（表观荧光、共焦、多光子和超分辨技术）、Western blotting和ELISA。

荧光探针的选择取决于许多实验变量，如下所述。还有一个Spectra Viewer Tool可帮助进行实验设计。

Jackson荧光粉选择技巧：

荧光团的选择取决于预期应用。样品的具体情况会影响选择，因为它们可能适应特定荧光团的使用，而制备可能会改变荧光团的行为方式。下表列出了一些与为特定技术选择荧光团相关的注意事项。

仪器性能

考虑激发能力（灯、激光器或LED决定激发波长）以及可用通道和滤波器的数量。还应考虑检测系统、数据收集持续时间和分析后分析。

需要灵敏度

任何荧光抗体结合物的检测水平取决于染料的亮度和光稳定性；抗体活性、特异性和交叉反应性；最佳染料抗体比（每摩尔抗体的染料摩尔数）。已对每种JIR染料结合物的这些参数进行了研究，以优化抗体检测水平并最小化背景。较大的藻胆蛋白具有较高的量子产率（非常明亮），但仅限于表面应用。通过选择较亮的荧光团，可以增强对表达差的分析物的检测。例如，Alexa Fluor®488比FITC更亮。

实验样品

考虑样本的自体荧光和重组荧光标记蛋白的可能表达。选择光谱不与内源性荧光重叠的荧光团。

要求分色程度

对于多种标记协议，染料面板的选择将受到上述仪器和样品细节的限制。要实现良好的分色，请选择光谱重叠最小的荧光团。

Jackson光谱查看器

荧光探针或荧光团（荧光染料或蛋白质）与二级抗体或链霉亲和素偶联，以使分析物可视化。每个荧光团都有自己的光谱特性，分子特有的激发光谱和发射光谱。使用光谱查看器构建染料面板，并比较染料的适用性。通常建议用于多重标记的四种染料是预先装载的，可以根据需要进行更改。