ATG8自噬蛋白参数说明及实例展示

ATG8（自噬相关蛋白8）参与自噬过程中细胞内成分的降解和再循环。ATG8是莱茵衣藻（Chlamydomonas reinhardtii）中的分子自噬标记（Pérez-Pérez等人，2010，Plant Physiol.152:1874-88）。

ATG8自噬蛋白基本参数：

中文名称：ATG8 |自噬相关蛋白

英文名字：ATG8 | Autophagy-related protein

规格：50ul

应用类型：Immunolocalization (IL), Western blot (WB)

免疫原：Fragment of recombinant ATG8 from Chlamydomonas reinhardtii, UniProt: A8JB85

来源宿主：兔

保存建议：在-20°C下冷冻干燥/复原储存；一旦复原，就进行等分，以避免重复的冻融循环。请记得在打开管子之前短暂旋转管子，以避免因材料粘附在管子的盖子或侧面而造成的任何损失。

对于拟南芥，与叶材料相比，使用ATG8抗体获得的信号在根的情况下更干净。为了获得最佳结果，请遵循Álvarez等人（2012）中描述的提取方案。ATG8信号对应于两条17kDa的带。

拟南芥细胞提取物的制备：

A、 植物首先受到自噬激活条件的影响：营养（氮或碳）限制或氧化以激活该降解过程。

B、 总蛋白提取物可按Álvarez的描述获得。叶片在液氮中研磨提取缓冲液体积（100mM Tris-HCl pH 8、400mM蔗糖、1mM EDTA、0.1mM苯甲基磺酰基氟化物（PMSF）、10 mg/ml脱氧胆酸钠、10µg/ml亮蛋白肽、10µg/ml蛋白抑制素A、4%（v/v）蛋白酶Roche的抑制剂鸡尾酒）。

C、 通过在4°C下以500 g离心10分钟去除细胞碎片。

重要说明：

建议使用更大的凝胶以获得更好的ATG8谱带分辨率。Midi protean凝胶更好而不是迷你凝胶。有9种ATG8亚型，这种抗体可能会识别所有这些亚型。

ATG8自噬蛋白应用实例：

图2：在15%SDS-PAGE上分离来自莱茵衣藻和拟南芥的15µg总蛋白使用半干法转移的硝化纤维素膜。在室温（RT）下，用5%的PBS干牛奶在搅拌下封闭印迹1小时。污渍在4ºC搅拌下，以1:1 000的稀释度在一级抗体中孵育过夜。倾析抗体溶液并进行印迹然后在室温搅拌下在TBS-T中洗涤一次15分钟和3次5分钟。在二级培养基中培养印迹抗体（抗兔IgG马萝卜过氧化物酶缀合物，AS09 602，来自Agrisera）在5%干牛奶中稀释至1:10 000，在RT下1小时煽动根据制造商的说明，如上所述洗涤印迹并用化学发光检测试剂显影5分钟说明书暴露时间为60秒。由西班牙IBVF的María Esther Pérez-Pérez博士和Ana M.Laureano Marín提供图1：根据Perez Perez等人的研究，用裂解缓冲液提取来自莱茵衣藻的30µg总蛋白，对照（C），自噬诱导（A）2010（植物生理学152:1874-1888）在15%SDS-PAGE上分离储罐转移。在室温（RT）下，用5%的牛奶在搅拌下封闭印迹1h。印迹在一级抗体中孵育在室温搅拌下，1:1000稀释1h。倾析抗体溶液并短暂冲洗印迹两次，然后洗涤一次15并在室温下在TBS-T中搅拌3次5分钟。印迹在二级抗体（抗兔IgG马萝卜过氧化物酶来自Agrisera AS09 602的缀合物，稀释至1:25 000）在RT下搅拌1小时。如上所述洗涤印迹，并用化学发光检测试剂。曝光时间为45秒。由西班牙IBVF的María Esther Pérez Perez博士提供

ATG8自噬蛋白相关文献参考：

Zharova et al. (2022) Role of Autophagy in Haematococcus lacustris Cell Growth under Salinity. Plants. 2022;

11(2):197.

Li et al. (2021) Chloroplast proteotoxic stress-induced autophagy is involved in the degradation of chloroplast proteins1/2 in Chlamydomonas reinhardtii. Plant Cell Physiol. 2021 Feb 17:pcab029. doi: 10.1093/pcp/pcab029. Epub ahead of print. PMID: 33594417.

Li et al. (2021) The unfolded protein response plays dual roles in rice stripe virus infection through fine-tuning the movement protein accumulation. PLoS Pathog. 2021 Mar 4;17(3):e1009370. doi:10.1371/journal.ppat.1009370. Epubahead of print. PMID: 33662041.

Sun et al. (2021) Mechanistic insights into an atypical interaction between ATG8 and SH3P2 in Arabidopsis thaliana.

Autophagy. 2021 Oct 17:1-17. doi: 10.1080/15548627.2021.1976965. Epub ahead of print. PMID: 34657568.

Mishra et al. (2021) Interplay between abiotic (drought) and biotic (virus) stresses in tomato plants. Mol Plant Pathol.2021 Dec 30. doi: 10.1111/mpp.13172. Epub ahead of print. PMID: 34970822.