Covalab丨骆驼血VHH碎片解决方案

骆驼科产生由 2 条重链和 2 条轻链组成的常规抗体，这些抗体与 Y 形的二硫化物键结合在一起。然而，它们也产生免疫球蛋白G的独特亚类，也称为重链IgG（hcIgG）。

这些抗体仅由两条没有CH1区域的重链和在其N末端的抗原结合域（称为VHH）组成。

hcIgG的独特之处在于其单体抗原结合区（VHH）能够结合具有特异性、亲和力，尤其是多样性的抗原，与传统抗体相当，而无需与其他区域配对。使用分子工程可以产生VHH碎屑。

为什么要使用Covalab VHH片段？

结合隐藏的表位：

它们的空间位阻减少，使它们能够到达传统抗体无法获得的难以获得的抗原，例如酶的活性位点（有助于抑制酶活性）以及较小的酶，例如溶菌酶或核糖核酸酶。

更好的渗透性：

与传统抗体相比，它们穿透组织的能力增强，在进行免疫组织化学时可以更精确地对组织切片进行染色。

更稳定：

VHH区域的高再折叠能力使它们在热力学上更加稳定，并能抵抗高温（高达70°C / 158°F）和极端pH值，如胃酸。

Covalab VHH开发：

1-骆驼免疫接种

免疫：

根据Covalab的 88 天方案，免疫步骤包括 4 次注射和 2 次测试出血。

监测：

免疫反应性通过为该项目开发的检测方法进行监测。

2-噬菌体文库构建

PBMCs分离和RNA提取：

从最终出血中分离外周血单核细胞（PBMC）并提取总RNA。

cDNA合成和VHH扩增：

RT-PCR 和 VHH 抗体片段扩增

特异性引物设计用于在VHH编码区域内进行逆转录，第二次嵌套PCR允许cDNA扩增。

噬菌体载体克隆：

VHH编码基因被整合到噬菌体载体中，然后用于转化感受态细菌以产生噬菌体文库。

3-平移

目标交互：

将抗原固定在微量滴定板孔的底部，将噬菌体制剂加载到孔中，使其通过在其表面表达的VHH结合抗原。

放大：

洗掉未结合的噬菌体后，剩余的噬菌体被转导成感受态细菌进行富集和扩增。

选择：

在每个淘选阶段结束时，分离编码抗原特异性VHH的cDNA

4- 生产和净化

表达载体中的亚克隆：

插入片段被整合到表达载体中，然后用于转化感受态细菌。

培养、裂解和亲和色谱纯化：

通过亲和色谱从培养物上清液中纯化特异性VHH。

所有编码特定VHH的cDNA都保存在我们的实验室中。