双链特异性DNA酶化学性质&使用说明

dsDNA酶是一种核酸内切酶，它切割DNA中的磷酸二酯键，产生具有5'-磷酸和3'-羟基的寡核苷酸。dsDNA酶特异性地消化双链DNA（dsDNA），而不消化单链DNA、引物、探针和RNA。dsDNA酶是热敏的，在55°C时可快速失活。它主要用于在逆转录实验之前快速去除RNA样本中的基因组DNA污染。与使用DNA酶I去除基因组DNA污染的传统方法相比，dsDNA酶不需要额外的EDTA来灭活，减少了RNA损伤，节省了实验时间，并确保了RNA水平的准确定量。

双链特异性DNA酶：

Cat #: C-BSM0206

Size: 50 rxns

Storage: -20°C

酶活性定义：

根据Kunitz测定方法，在25°C的pH 5.0下，当使用过量的高分子量DNA作为底物，酶活性在每分钟260 nm处导致吸光度增加0.001时，酶活性定义为1个单位（U）。

储存缓冲液：

25 mM Tris-HCl（pH 7.5，在25°C下）、2.0 mM MgCl2、10 mM NaCl、0.01%（v/v）Triton X-100、50%（v/v）甘油。

抑制和灭活

抑制作用：金属离子、EDTA、SDS、DTT、β-巯基乙醇、高盐离子浓度等均可抑制

dsDNA酶。

灭活：在55°C下培养5分钟。

质量控制

蛋白质纯度

经SDS-PAGE和考马斯亮蓝染色测定，酶纯度≥90%。

RNA核酸酶活性

将酶与RNA底物在37°C下孵育1小时，并进行凝胶电泳以确认RNA底物的节点降解。

功能测试

该产品测试了从RNA样品中去除基因组DNA和随后的RT-qPCR扩增，显示去除率≥99.9%。RNA的数量不受dsDNA酶处理的影响。

双链特异性DNA酶使用说明：

1.在冰上按如下方式制备反应混合物：

2.轻轻拍打并混合反应混合物，然后将混合物在37°C下孵育2-5分钟。

3.在65°C下加热灭活2分钟，并迅速将获得的RNA放在冰上进行后续实验。对于长期储存，应在-80°C下储存，避免重复冻融循环

备注

1.如果RNA样品的下游应用是RT-PCR，并且靶基因长度≥3kb，则在灭活步骤之前添加最终浓度为10mM的DTT。

2.为了防止RNA降解，在反应混合物中加入适量的RNase抑制剂。

该试剂仅用于科学研究领域，不适用于临床诊断或其他用途。