异硫氰酸荧光素标记的抗体方案

FITC（荧光素异硫氰酸酯）可以与各种抗体蛋白结合，而不会失去其对关节蛋白的特异性。一旦结合，抗体在碱性溶液中表现出强烈的黄绿色荧光。相应抗原的定性、定位或定量检测可以通过荧光显微镜观察或流式细胞术分析进行。它被用于医学、农业和兽医科学等各个领域，用于快速诊断由细菌、病毒、寄生虫和其他病原体引起的疾病。

异硫氰酸荧光素：

Cat #: B-CHM100

规格：100 mg

储存：储存温度为-20°C，避光保存。

配方：C₂₁H₁₁NO₅S

兆瓦：389.38

纯度：≥95%（HPLC）

光谱特性：Ex/Em=490/525 nm

外观：黄色粉末

运输和储存：

储存条件：储存温度为20°C，避光。

稳定性：在适当的储存条件下稳定至少12个月。

异硫氰酸荧光素标记的抗体方案：

（1） 将待交联的蛋白质（浓度：1mg/mL）在交联反应缓冲液中在4°C下透析三次，将pH调节至9.0。交联缓冲液的制备：溶解7.56 g NaHCO3，1.06 g Na₂CO3和7.36g NaCl在水中的溶液稀释至1L的最终体积。

（2） 将FITC以1 mg/mL的浓度溶解在二甲基亚砜中。为每次交联反应准备新鲜的FITC溶液，并避免暴露在光下。

（3） 将FITC缓慢添加到抗体溶液中，比例为P：F（蛋白质：FITC）=1 mg：150μg。轻轻混合溶液，同时加入FITC，以确保与抗体均匀混合。让反应在黑暗中在4℃下进行8小时。

（4） 添加5 mol/L NH₄Cl最终浓度为50 mmol/L，在4°C下停止反应2小时。

（5） 将缀合物相对于PBS溶液透析至少四次，直到透析液变得清澈为止。

（6） 交联材料的特性：

蛋白质浓度（mg/mL）=[A280-0.31×A₄gs]/1.4

F/P比：3.1×A₄gs/[A280-0.31×A₄gs]。该值应介于2.5～6.5之间。

（7） 将FITC蛋白偶联物储存在pH 7.4的PBS中，补充0.1%的NaN3和1%的BSA，在4°C的黑暗中储存。