Cell Biolabs脂质提取试剂盒样品的制备方案

脂质是一类多样化的分子，包括单甘酯、二甘酯、三甘酯、脂肪、固醇等。脂质不仅定义和保持细胞膜完整性，还参与细胞过程，如膜转运、信号转导、细胞凋亡和能量储存。脂质代谢紊乱与多种疾病有关，如癌症、糖尿病、阿尔茨海默病和冠心病。

为了研究脂质，通常需要首先从组织或培养细胞中提取脂质。传统上，优先选择的是Folch方法进行有机提取，但该方法存在一些缺点。首先，它将脂质提取到底部的有机相中，在纯化过程中需要穿透上层含有蛋白质的相，导致脂质样本受到污染。因此，低纯度的脂质样本可能会阻塞高压液相色谱仪（HPLC）等仪器，从而妨碍下游的脂质分析。此外，Folch方法使用氯仿作为有机相溶剂。长期吸入氯仿会对肝脏产生影响，如肝炎和黄疸。此外，已经证明氯仿对动物具有致癌作用，导致肾脏和肝脏肿瘤的增加。实际上，美国环境保护局（EPA）将氯仿分类为B2组，即可能对人类具有致癌作用。

Cell Biolabs的脂质提取试剂盒（#STA-612）通过有机提取分离总脂质，但通过将脂质提取到上层无氯仿的有机相（适用于高通量提取），规避了上述缺点。将粗脂质样本（如血清或组织培养细胞沉淀）悬浮于一种专有醇中。在添加专有有机化合物后，混合物通过离心进行相的重力分离。然后将回收的上层有机相干燥并重新悬浮以进行下游脂质分析。每个试剂盒提供足够的试剂，可根据100 µL样本量进行最多50次提取。可以使用更大的样本量，每个试剂盒提供的提取次数会相应减少。

脂质提取试剂盒组成：

脂质提取试剂A（零件号261201）：一个25 mL琥珀色玻璃瓶。

脂质提取试剂B1（零件号261204）：两个30毫升琥珀色玻璃瓶。

脂质提取试剂B2（零件号261205）：一个20 mL琥珀色玻璃瓶。

脂质提取试剂C（零件号261203）：一瓶25 mL

脂质提取试剂盒相关研究：

1. STA-613：脂质定量试剂盒（比色法）

2. STA-369：OxiSelect™人类氧化低密度脂蛋白（MDA-LDL）ELISA试剂盒（MDA-LDL定量）

3. STA-384：总胆固醇测定试剂盒（比色法）

4. STA-391：HDL和LDL/VLDL胆固醇测定试剂盒

5. STA-394：HDL胆固醇测定试剂盒

6. STA-396：血清甘油三酯定量试剂盒（比色法）

7. STA-398：游离甘油测定试剂盒（比色法）

8. STA-618：游离脂肪酸测定试剂盒（比色法）

9. STA-600：磷脂酰胆碱测定试剂盒

样品的制备：

·血浆：使用柠檬酸盐、EDTA、肝素或草酸盐等抗凝剂采集血液，并通过倒置混匀。将血液在4°C下以1000 x g的速度离心10分钟。收集上清的血浆，避免干扰白色细胞沉淀层。样本应立即提取或存储在-80°C。

·血清：在无抗凝剂的管中采集血液。让血液在室温下凝结30分钟。以2500 x g的速度离心20分钟。去除黄色的血清上清，避免干扰白色细胞沉淀层。样本应立即提取或存储在-80°C。

·培养细胞：以1000 x g的速度离心5分钟，沉淀5-10 x 106个细胞。用1X PBS洗涤细胞一次，然后用100 µL 1X PBS重新悬浮最终的细胞沉淀。按照试剂盒方案中的描述进行提取。

·组织：使用手术刀/剃刀将组织小心切割成小片，并称量到50 mL锥形管中。加入足够的PBS使组织最终浓度达到2 mg/mL。在4°C下均质化组织。按照试剂盒方案中的描述，从整个组织匀浆中进行提取。