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抗体纯化:免疫亲和纯化技术的选择标准是什么?

制备高特异性、高效价的抗体是实验免疫学技术的基础,抗体质量的高低将直接影响试验的成败。 通过不同方法制备的抗体往往与多种杂蛋白混杂在一起,为了获得成分相对单一的抗体或将抗体用于特定的用途,就需要进行抗体纯化。从成分的角度分析, 抗体分子是一类蛋白质分子,与其他蛋白质一样,它有一定的等电点、溶解度、荷电性及疏水性,可以用电泳、 盐析沉淀或其他层析技术进行分离、纯化。

技术:

免疫亲和纯化是另一种可能需要纯化抗体的技术。在这一技术中,抗体共价交联到一固相基质上,如交连的琼脂糖或聚丙烯酰胺微球。常用的方法是,先将抗体纯化,然后连接到通过化学方法激活而具有结合位点的微球上。此时,抗体的纯化对实验的成功至关重要。

试验:

还有一种需要纯化抗体的试验,是从多克隆抗血清中分离抗原特异性抗体。多克隆血清中含有复杂多样的抗体,它不仅含有针对免疫原产生的抗体,还有血清的全部抗体。出于特定目的的需要,必须将抗原的特异性抗体分离出来。例如使用抗肽抗体时,需要分离出特异性识别肽段的抗体。通过纯化能获得特异性很高的抗体。纯化抗体的另一用途是降低本底。几乎在所有技术中,使用纯化抗体都能降低非特异性本底。产生这种效果主要是因为一方面能去除引起实验误差的污染蛋白,另一方面能较精确控制实验中产生阳性信号的抗体量。使用纯化抗体不会使本底增加,因此纯化抗体可以作为所有免疫化学实验中降低本底的基本手段。

抗体的纯化通常是浓缩抗体的简单方法。任何来源的抗体可以用蛋白A或蛋白G的纯化方法来浓缩。

PurKine™ 蛋白A树脂 #BMR20500

PurKine™ 蛋白G树脂 #BMR20600

PurKine™ 蛋白L树脂 #BMR20800

PurKine™ 抗体纯化SulfoLink树脂 #BMR21000

PurKine™ 抗体纯化试剂盒(蛋白A/G) #KTP20704

尽管纯化抗体的方法较多,建议用蛋白A或蛋白G微球纯化法作为zui常用的方法。这种方法效率高,能为常用的实验方法提供足够纯化的抗体,而且随着商品化的蛋白A和蛋白G基质的出现,能将任何来源的抗体纯化。抗体的纯化也可采用传统的色谱法,在某些情况下非常有用。这些方法包括DEAE离子交换色谱法、硫酸铵沉淀法及其他方法。但是用蛋白G或蛋白A亲和柱法纯化较其他方法简单,并且纯化效果是其他方法的数倍。

所以我们在选择相应产品线时,应根据以下几个标准参考哦:

1.高载量—每毫升树脂可以结合超量毫克的免疫球蛋白。

2.高性能—通过基因工程手段,去除其它非必需结构域,减少非特异性吸附。

3.同一树脂可重使用五次以上,且性能不降低。

4.使用灵活—多形式产品选择,树脂填料、预装柱、完整试剂盒。

5.简易操作—提供预先配置好的各类缓冲液。

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