无菌室管理制度

【11】无菌室操作规程

http://bbs.foodmate.net/thread-324297-1-1.html

1.目的

本规程旨在为无菌操作及无菌室的保护提供一个标准化规程。

2.安全注意事项

严格无菌操作，防止微生物污染；操作人员进入无菌室应先关掉紫外灯。

3.规程

3.1 无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。

3.2 严防一切灭菌器材和培养基污染，已污染者应停止使用。

3.3 无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。

3.4 需要带入无菌室使用的仪器，器械，平皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过适宜的方法灭菌。

3.5 工作人员进入无菌室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒。

3.6 无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌30分钟以上，并且同时打开超净台进行吹风。操作完毕，应及时清理无菌室。

3.7 供试品在检查前，应保持外包装完整，不得开启，以防污染。检查前，用70％的酒精棉球消毒外表面。

3.8 每次操作过程中，均应做阴性对照，以检查无菌操作的可靠性。

3.9 吸取菌液时，必须用吸耳球吸取，切勿直接用口接触吸管。

3.10 接种针每次使用前后，必须通过火焰灼烧灭菌，待冷却后，方可接种培养物。

3.11 凡带有活菌的物品，必须经消毒后，才能在水龙头下冲洗，严禁污染下水道。

3.12 无菌室应每月检查菌落数。在超净工作台开启的状态下，取内径90mm的无菌培养皿若干，无菌操作分别注入融化并冷却至约45℃的营养琼脂培养基约15ml，放至凝固后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，证明无菌后，取平板3～5个，分别放置工作位置的左中右等处，开盖暴露30分钟后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，取出检查。100级洁净区平板杂菌数平均不得超过1个菌落，10000级洁净室平均不得超过3个菌落。如超过限度，应对无菌室进行彻底消毒，直至重复检查合乎要求为止。

【10】无菌室紫外消毒后异味   

无菌室紫外消毒后异味的消除

1) http://bbs.foodmate.net/viewthread.php?tid=343981

新建的无菌室每次用紫外消毒后异味很大，不知是什么原因，怎么消除？

无菌室的窗户用的是塑钢、玻璃胶以及黑皮条，有点像橡胶材质。此外，地面胶也不知用的是哪一类，我们部门的人不太懂。

在此先行谢过各位仁兄！ 

有空气净化系统吗?

若有、启动净化系统，运行,通过换气解决。

若没有、只有关闭紫外线灯后，30分钟后进入。

若是装修材料自身造成的，估计只有通过时间慢慢地衰弱了。

【9】无菌室设计要求  

3）无菌室及生物安全实验室门的方向 http://bbs.foodmate.net/thread-563440-1-1.html

正压门朝内，负压门朝外呗

正压内开 负压外开

2）无菌室技术要求

　http://bbs.foodmate.net/thread-446906-1-1.html

1、无菌室设计面积为10M2，规格为2.5*4M。

2、无菌室至少有工作间，更衣室和缓冲间三部分，风淋室有或无均可。

3、无菌室必须安装专用传递窗1个和操作台1张，操作台宽度应控制在850MM之间。

4、无菌室内要求安装合乎要求的空调及空气过滤设备，所有进入无菌室的空气都要经过过滤处理，空气洁净度不少于1万级（国家标准），如能达到千级或百级更好。无菌室内 气温在夏季应能控制到小于或等于28度。 

5、无菌室内要求安装抽滤设备。能按照《生活饮用水标准检验法》GB5750-85中滤膜法检验自来水中大肠菌的要求进行操作，并且能同时进行八个水样检验操作。

6、无菌室内须安装足够的照明设备，能保证夜晚也能进行细菌检验操作。

7、无菌室须安装专用紫外线灯。

8、无菌室内陆面应作适当处理，以防摩擦起尘。

9、无菌室内不得使用易燃材料装修。

10、无菌室照明灯、紫光灯、空气过滤设备、空调开关都要安装在室外。而抽滤设备控制开关要安装在室内。

11、无菌室顶的空调及空气过滤器安装必须牢固可靠，以防万无一失。

7＃不错,还要增加GB27405---2008和GB15981中的要求和常识.

1)化验室中的无菌室怎样建设？

http://bbs.foodmate.net/thread-383982-1-1.html

2#要看你是什么样的审核了，一般的审核吗只要密封性好，有缓冲间、有净化操作台就可以了.你可以坐下无菌室的下落菌看下，只要能保证需求就可以了，审核老师不是给你增加无谓的成本的。如果单位肥的流油的话建议找个专门的设计公司设计，目前有很多这样的公司，设计带安装的，你可以去网上搜下看。

 3#如果不用超净台的话，注意面积不要过小，我碰到过一个企业因无菌室面积只有5个平方不到被开出不合格项

 我们的无菌室加装一套空气净化装置，之前想建成百级无菌要求，但最终没达到，不过现在的已经够用了

 2） 微生物无菌室的问题

http://bbs.foodmate.net/thread-410224-1-1.html

　　想改造微生物无菌室，微生物无菌室和致病菌无菌室可以共用一个缓冲间吗？ 

　　首席大弟子：2＃致病菌的那个应该是生物安全实验室啊，不叫无菌室的，不可以合用的，如果同是无菌室，或同时生物安全实验室，那是可以的

【8】无菌室消毒 熏蒸 甲醛  

次氯酸钠、过氧乙酸、季铵盐/bbs.foodmate.net/thread-666291-1-1.html

·考虑化验室一些仪器的精密避免影响和能及时使用，还是用季铵盐吧，无色无味无腐蚀。熏蒸步骤：先计算面积，然后计算和配置所需化学品使用量，熏蒸浓度控制在2000ppm以内就可以了。熏蒸时候空间保持密闭。

10、4＃酒精擦面，酒精喷雾，我们化验室一直这样做的，经济bbs.foodmate.net/forum.php?mod=viewthread&tid=599767&goto=lastpost#lastpost

9)bbs.foodmate.net/thread-149550-1-1.html

  定期熏蒸的时候用高锰酸钾＋甲醛，每天做完检测后可以用3％来苏水或者0.1％的新洁而灭或75％的酒精擦拭台面和地面，只要平时注意，用到高锰酸钾＋甲醛的时候不是很多。不过，过上一周左右的时间就要测试一下无菌室的染菌情况.

  我们的方法：臭氧发生器消毒，试验完毕，用150PPm的Naclo擦拭案面。

  非常不建议用甲醛，因为有潜在致癌性，对人体有危害。我们实验室的无菌间采用的是二氧化氯，原液熏蒸，稀溶液拖地及抹台面，每周一次。 

  我们没有用过甲醛，因为有毒吗,做完实验用酒精喷一下，擦一下，再用紫外灯照应该就可以了吧，一个星期用消毒水脱一下地面

  甲醛熏蒸对人体伤害太大了，已经不推荐使用了！如果实验室霉菌孢子过多，万不得已的情况下再使用甲醛熏蒸，因为这是最有效杀死真菌孢子的方法。记住甲醛熏蒸后一周内实验室不要进人，进入前一天要用氨水中和一下空气中多余的甲醛。

  我们是用200PPM的消毒液擦示工作台面和门把手之类的，在用500PPM的消毒液托地。50PPM的消毒液洗手。实验前后各一次，（洗手只有一次就是工作前哈）另外实验前后紫外灯也要开的。

  建议用龙吟消毒液100-200倍稀释用喷雾器喷洒，0.5公斤/每立方米空间。另外也可用熏蒸处理，可用熏蒸器，也可用酒精灯按约每15-20平方米一盏的密度排放，铁三角架上面放置开口容器一只，内装200毫升左右龙吟50倍稀释液，密封点火加热，让其沸腾蒸发，室门关闭。人员离开，待6小时以后，再开门排气后使用。

  臭氧效果最好了   紫外效果不好

8）http://bbs.foodmate.net/thread-409449-1-1.html

①按照甲醛（40%）10毫升／立方米、高锰酸钾5克／立方米计算用量。不同情况下，用量有所不同，但比例为2：1。

②盛药容器要大、耐热、耐腐蚀：一般用陶瓷或玻璃容器，因为高锰酸钾和甲醛都具有腐蚀性，且混合后反应剧烈，释放热量。

③房间要密闭：这样熏蒸效果才会好。

④容器应尽量靠近门，以便操作人员迅速撤离；先将温水倒入容器内，后加入高锰酸钾，搅拌均匀；再加入甲醛；加入甲醛后人立即离开，密闭房间。

注意顺序：是将甲醛倒入高锰酸钾溶液内。

⑤消毒时间一般为20-30分钟。

⑥消毒后要打开门窗通风换气。

这里说的甲醛就是40%的甲醛溶液，也就是福尔马林，一般包装上写的是37%。

7)微生物室甲醛消毒

http://bbs.foodmate.net/thread-403173-1-1.html

  ①按照甲醛（40%）10毫升／立方米、高锰酸钾5克／立方米计算用量。不同情况下，用量有所不同，但比例为2：1。

  ②盛药容器要大、耐热、耐腐蚀：一般用陶瓷或玻璃容器，因为高锰酸钾和甲醛都具有腐蚀性，且混合后反应剧烈，释放热量。

  ③房间要密闭：这样熏蒸效果才会好。

  ④容器应尽量靠近门，以便操作人员迅速撤离；先将温水倒入容器内，后加入高锰酸钾，搅拌均匀；再加入甲醛；加入甲醛后人立即离开，密闭房间。

  注意顺序：是将甲醛倒入高锰酸钾溶液内。

  ⑤消毒时间一般为20-30分钟。

  ⑥消毒后要打开门窗通风换气。

  这里说的甲醛就是40%的甲醛溶液，也就是福尔马林，一般包装上写的是37%

6）微生物无菌室如何控制无菌？

http://bbs.foodmate.net/thread-400256-1-1.html

　　请问各位，微生物无菌室如何控制无菌？无菌室是密闭的，每天用前用臭氧机杀菌，紫外灯杀菌，但测到空气仍有有菌？之后试过用过氧乙酸熏蒸，依然有菌？请问是否还有别的方法可控制？ 

　　2＃ 没有独立的净化空调系统？彻底清理清洁的基础上，用甲醛or二氧化氯试试！支持3楼，无菌室有级别，比如III级，但是绝对不是一个菌没有，无菌室的密闭性应该很好。

　　5＃正好手边有资料。

等级        活微生物数/m3        

        沉降菌     浮游菌

100级        ≤1        ≤5

1000级       ≤3        ≤100

10000级      ≤10       ≤500

100000级

　6＃你的无菌室应该有空气净化系统吧，没有高效过滤，也应该有个类似于自净器那样的进风装置。

   首先保证进入的空气是经过过滤的，

   使用前彻底清洁消毒，墙面、地面，二氧化氯溶液擦几遍，空间熏蒸，以后也要定期做，

   做实验是在无菌操作台上，基本没啥问题了。

5）在无菌室消毒中使用乳酸熏蒸，是怎样进行的。

http://bbs.foodmate.net/thread-399427-1-1.html

　1＃在无菌室消毒中使用乳酸熏蒸，请有经验者介绍一下是怎样进行的。 

　2＃谢谢指点，我熏了后，环氧树脂地面好粘哦。 

　3＃别干这样的事情。会腐蚀各种金属材料的。对于实验室仪器，损害很大。建议使用臭氧发生器或者甲醛熏蒸。

4）http://bbs.foodmate.net/thread-246427-1-1.html

   4# 无菌室应每周和每次操作前用0.1%新洁尔灭或2%甲酚液或其他适宜消毒液擦拭操作台及可能污染的死角，开启无菌空气过滤器及紫外灯杀菌1小时。在每次操作完毕，同样用上述消毒溶液擦拭工作台面，除去室内湿气，用紫外灯杀菌半小时。

   6#要求好严格啊，我们基本一周才对无菌室擦洗一次，其他的就是实验前后用紫外灯消毒一小时了。 

   8#无菌操作室应具有空气除菌过滤的单向流空气装置，操作区洁净度100级或放置同等级别的超净工作台，室内温度控制18~26℃，相对湿度45%~65%。

  24#按照药品的要求比较高，做食品微生物的无菌室1000级即可，最好有个保持正压的空气过滤系统，但要经常检查落下菌落数，一般每次做实验的时候做空白对照，就是不加样液，其它操作一样，会提高检测准确度并容易找到问题。

3)http://bbs.foodmate.net/thread-386706-1-1.html

2#许老师：消毒无菌室滴空气可以用乳酸熏蒸啊，至于台面什么滴可以用一般滴消毒液啊

3＃微生物检测用洁净室具体要求，http://bbs.foodmate.net/viewthread.php?tid=246427

6＃实验室消毒一般采用的方法是紫外照射和臭氧熏蒸，如果污染严重可以使用二氧化氯或者甲醛进行熏蒸。表面消毒一般使用酒精、新洁尔灭。月度轮换使用。

　　9＃我们用紫外线照射和酒精消毒法，每周做一次落下菌确认~~

　　11＃我们现在用过氧乙酸进行熏蒸，效果不错。

1) http://bbs.foodmate.net/thread-9072-1-1.html

   3#利用氧化剂高锰酸钾与甲醛发生化学反应，在反应过程中产生大量的热，促使甲醛气化，为了防止着火，氧化剂的用量不宜过多，高锰酸钾的用量相当于甲醛的40%－50%。

   5#禽舍熏蒸消毒，一般按福尔马林（37%的水溶液称为福尔马林）30毫升/立方米、高锰酸钾15克/立方米和水15毫升/立方米计算用量较为适宜。一般24小时后即可使用，如不急用，最好可密闭 2周后再使用，以确保消毒效果。这是给鸡舍杀菌时用的方法。供你参考。我们无菌间也曾用过此法。不好请别见笑。

2)http://bbs.foodmate.net/thread-211363-1-1.html

   1#品生产企业使用甲醛熏蒸是否可以用 依据什么标准 熏蒸后甲醛残留量如何控制 遵循什么标准 自己不能测定 应请何部门测定 望知道的给予答复

  2#可以使用，我们公司就用此法，但不要经常用，一般抽风时间长点就可以了。

  3#甲醛熏蒸用量一般是每M3空间2ML甲醛，密闭熏蒸4小时以上，经长时间通风后无刺激性气味即可，如急需使用，在进风口放置一小盘氨水，可中和甲醛，残留量从未测过。

3)http://bbs.foodmate.net/thread-6652-1-1.html

  1#如何对生产区进行熏蒸？用什么药剂和设备？

  3#配置高浓度的二氧化氯溶液，大致在20000ppm，在敞口容器中自然挥发就可起到熏蒸效果。注意最好多布几个点，以使扩散效果良好，而且布点应尽量接近通风口。

  5#我用过高锰酸钾与甲醛,按2:1(每立方米10ml:5g)的比例去配制熏蒸无菌室,车间也做过,先把甲醛倒在玻璃瓶中,然后加入高锰酸钾后就离开,关闭门窗熏蒸4小时或过夜,使用必须注意,甲醛挥发对眼有刺激性,并有致癌的可能性. 

  6#(三)熏蒸消毒?

    熏蒸消毒是利用消毒药物气体或烟雾，在密闭空间内进行熏蒸达到消毒目的。该方法既可用于处理室内空气(污染的空气)，亦可用于处理污染的表面。食品生产经营场所应定期实施熏 蒸消毒，以保证生产场所及空气的清洁。?

    (1)乳酸熏蒸?

    乳酸是无色至浅黄色糖浆状液体，沸点122℃，蒸发时加热至150℃左右。当乳酸在空气中浓度为0.04mg/m３时，经40s可杀灭绝大多数细菌。浓度低于0.003mg/m3时，杀菌效果降低， 实际应用时在25～30m的空间，用乳酸4～5ml加等量水，使用酒精灯加热蒸发，密闭2～3h。 消毒时最适相对湿度60～80%，低于60%效果下降。?

    (2)甲醛熏蒸?

    甲醛是无色气体、有特殊的刺激气体，其沸点-19.5℃，易溶于水和乙醇。40%甲醛水溶液称福尔马林。甲醛气体具有广谱、高效杀菌作用且使用方法简单、方便，对消毒物品无损害， 对人安全，使用甲醛气体熏蒸消毒，在一般密闭情况下对经营场所内空气，亦可对场所内墙 壁、机械设备等表面消毒。对污染严重的霉斑有良好效果。?

    甲醛气体消毒简便易行，多以煮沸福尔马林，将福尔马林置于陶瓷或玻璃或金属器皿中，直接在火源上加热蒸发。药液蒸发完毕后，应及时撤除火源。消毒使用量一般为18ml/m3。要 求消毒环境湿度保持在70～90。必要时可加水煮沸保持湿度。密闭24h。?

应用甲醛气体消毒有一定的毒性与刺激性和特殊臭味，应用在食品生产加工场所要注意室内 不可存在食品，并提好个人防护。?

    (3)过氧乙酸薰蒸?

    过氧乙酸(过醋酸)为高效灭菌剂。为无色透时液体，有刺激性酸味。易挥发，沸点110℃， 腐蚀性强，有漂白作用。过氧乙酸熏蒸消毒适用于密封较好的房间内污染表面的处理。常用 的过氧乙酸为20%溶液。过氧乙酸蒸气的产生方法是使用陶瓷或搪瓷或玻璃容器加热。使用 环境宜在20℃，相对湿度70～90%，使用剂量为过氧乙酸1g/m3，熏蒸时间60～90min。达到 规定时间后，要通风排气。

【7】无菌室 超净工作台 送风系统    

1）无菌室送风系统 请教

http://bbs.foodmate.net/thread-325600-1-1.html

　我们微生物净化室的层流罩是垂直送风的，由上往下，操作时酒精灯的火苗就被吹得飘忽不定，请问我该如何解决？是不是要关闭送风？另外局部百级净化室送风速度要求是多少？

2）想知道无菌操作台是水平送风好还是垂直送风好

http://bbs.foodmate.net/viewthread.php?tid=270442

　如题.因为最近实验室要买个无菌操作台.老师说买个单人双面的,但双面的一般是垂直送风,有人跟我说垂直送风的比较容易污染,没有水平送风的好.不知论坛上的各位前辈有没有这方面的经验呢.多谢了.

　我们用的是垂直送风的两人的，还不错；

　垂直好！水平会把酒精灯吹灭！

【6】样品进无菌室是否需要紫外杀菌再

样品进无菌室是否需要紫外杀菌再用酒精棉檫拭

http://bbs.foodmate.net/thread-313624-1-1.html

如题!!!

有人说不要紫外杀菌，因为本要做微生物，这样不就再一次把产品灭菌啦

可是紫外线的穿透力很差，如果用报纸什么的挡一下应该问题不大吧

我想请问各位你们在做实验时是怎么做的

谢谢

【5】无菌室管理制度 

大家的无菌室灭菌的http://bbs.foodmate.net/forum.php?mod=viewthread&tid=694142&fromuid=1667

3）http://bbs.foodmate.net/thread-368802-1-1.html无菌室里应该放那些必备的设备？

2)http://bbs.foodmate.net/thread-461201-1-1.html

  7# 上次我们申请QS的时候，审查人员看到我们无菌室里边放了一个柜子都说：“无菌室里边除了必要的仪器外，其他杂物就不要放了！哈哈

  12#不可以，致病菌必须在二级生物安全实验室操作，我看你们这个无菌室二月改成二级生物安全实验室了吧

1） 无菌室的管理制度

http://bbs.foodmate.net/thread-257061-1-1.html

a、        无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防止污染。

b、        无菌室应备有工作浓度的消毒液，如75%的酒精。

c、        无菌室应每周用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。

d、        需要带入无菌室使用的仪器、器械、平皿等一切物品，均应包扎严密， 并应经过灭菌。

e、        工作人员进入无菌室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换专用工作服、鞋、帽子、口罩和手（用75%的乙醇再次擦拭双手），方可进入无菌室进行操作。

f、        无菌室使用前必须打开无菌室的紫外线灯辐照灭菌30分钟以上，或用臭氧发生器灭菌1小时。操作完毕，应及时清理无菌室，再用紫外线灯辐照灭菌20分钟或用臭氧发生器灭菌1小时。

g、        供试品在检查前，应保持外包装完整， 不得开启， 以防污染。检查前，用75%的酒精棉球消毒外表。

h、        每次操作过程中，均应做阴性对照，以检查无菌操作的可靠性。

i、        吸取菌液时，必须用吸耳球吸取，切勿直接用口接触吸管。

j、        接种针每次使用前后，必须通过火焰灼烧灭菌，待冷却后 ，方可接种培养物。

k、        如有菌液洒在桌上或地上，应立即用5%石碳酸溶液或3%的来苏尔倾覆在被污染处至少30分钟，在作处理。工作衣帽等受到菌液污染时，应立即脱去， 高压蒸汽灭菌后洗涤。

2）无菌室

http://bbs.foodmate.net/thread-297475-1-1.html

1.目的：本规程旨在为无菌操作及无菌室的保护提供一个标准化规程。

    2.适用范围：生测实验室

    3.责任者：QC主管生测员

    4.定义：无

    5.安全注意事项：严格无菌操作，防止微生物污染；操作人员进入无菌室应先关掉紫外灯。

    6.规程

    6.1.无菌室应设有无菌操作间和缓冲间，无菌操作间洁净度应达到10000级，室内温度保持在20-24℃，湿度保持在45-60%。超净台洁净度应达到100级。

    6.2.无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。

    6.3.严防一切灭菌器材和培养基污染，已污染者应停止使用。

    6.4.无菌室应备有工作浓度的消毒液，如5％的甲酚溶液，70％的酒精，0.1％的新洁尔灭溶液，等等。

    6.5.无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。

    6.6.需要带入无菌室使用的仪器，器械，平皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过适宜的方法灭菌。

    6.7.工作人员进入无菌室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换专用工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用70%的乙醇再次擦拭双手)，方可进入无菌室进行操作。

    6.8.无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌30分钟以上，并且同时打开超净台进行吹风。操作完毕，应及时清理无菌室，再用紫外灯辐照灭菌20分钟。

    6.9.供试品在检查前，应保持外包装完整，不得开启，以防污染。检查前，用70％的酒精棉球消毒外表面。

    6.10.每次操作过程中，均应做阴性对照，以检查无菌操作的可靠性。

    6.11.吸取菌液时，必须用吸耳球吸取，切勿直接用口接触吸管。

    6.12.接种针每次使用前后，必须通过火焰灼烧灭菌，待冷却后，方可接种培养物。

    6.13.带有菌液的吸管，试管，培养皿等器皿应浸泡在盛有5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒，24小时后取出冲洗。

    6.14.如有菌液洒在桌上或地上，应立即用5%石碳酸溶液或3％的来苏尔倾覆在被污染处至少30分钟，再做处理。工作衣帽等受到菌液污染时，应立即脱去，高压蒸汽灭菌后洗涤。

    6.15.凡带有活菌的物品，必须经消毒后，才能在水龙头下冲洗，严禁污染下水道。

    6.16.无菌室应每月检查菌落数。在超净工作台开启的状态下，取内径90mm的无菌培养皿若干，无菌操作分别注入融化并冷却至约45℃的营养琼脂培养基约15ml，放至凝固后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，证明无菌后，取平板3～5个，分别放置工作位置的左中右等处，开盖暴露30分钟后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，取出检查。100级洁净区平板杂菌数平均不得超过1个菌落，10000级洁净室平均不得超过3个菌落。如超过限度，应对无菌室进行彻底消毒，直至重复检查合乎要求为止。

    7.参照：《药品卫生检验方法》、《中国药品检验标准操作规范》中(无菌检查法)章节、中华人民共和国医药行业标准YY/T0188.6-1995《药品检验操作规程》。

    8.分发部门：质量管理部

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