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TSH定量酶联免疫分析(ELISA)
TSH定量酶联免疫分析(ELISA)
试剂盒使用说明书
 
 
概述]
测定人血清中TSH的浓度是诊断甲状腺功能和研究下丘脑—垂体—甲状腺轴的重要指标之一。本试剂盒在诊断甲状腺功能低下和鉴别原发性与继发性(垂体性或下丘脑性)甲状腺功能低下等方面是不可缺少的重要指标。在对甲亢和甲低治疗时,其TSH的浓度也将明显发生变化,因此测定血清TSH浓度也可用作疗效的判断。
 
一、测定原理  
 
   试剂盒采用酶联免疫分析方法。采用两株单克隆抗体,一株用于固相包被制备固相抗体,另一株用于HRP的标记制备HRP-抗体。在包被抗体的微孔中加入TSH(标准或待测样品)及HRP-抗体,平衡后形成“固相抗体-抗原-HRP-抗体”的复合物,显色后,用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)。随着TSH浓度的升高,OD值逐渐升高并呈较好的线性关系。本试剂盒具有灵敏度高`,特异性强,重复性好,操作简便,快速等特点,对血清中TSH的减少或升高有可靠的检出性能。
 
二、组成及配制
 
组份/规格                  96T                          
微孔板                     12孔/条×8条    
酶标抗体                   6ml/瓶×1瓶
标准品一套                 1ml/瓶×7瓶
质控血清一套               1ml/瓶×2瓶
A液                        6ml/瓶×1瓶     
B液                        6ml/瓶×1瓶    
终止液                     6ml/瓶×1瓶     
浓缩洗涤液                 15ml/瓶×1瓶    
 
 
 
 
说明:1、浓缩洗涤液使用:用蒸馏水稀释20倍使用,如有盐析出,稀释后水浴加温助溶。
 
 
 
 TSH标准品浓度:
 
标准品
S1
S2
S3
S4
S5
S6
浓度μIU/ml
0.3
0.6
1.5
3.0
6.0
12.0
以上各组份应在使用前充分摇匀。
 
三、操作方法
 
1、样品采集:不必要空腹抽血,取静脉血清,放2~8℃可保存一周,若需放置较长时间,需在-25℃保存;脂血样品影响测定结果。
 
2、操作方法及步骤:
        
各种试剂或样品的加样量(μl)
 
孔别    NSB孔  标准孔  质控血清    待测样本孔
S1-S6      -       100       -           -                              
样品      -        -        -          100                              
质控血清   -       -        100         -
酶标抗体   -      50       50          50
混匀,37℃温育2小时。
弃各孔内液体,用洗涤液注满各孔,静置10秒甩去扣干,重复3~5次。
        
 
 每次实验设一个空白孔,每孔(包括空白孔)加A液一滴(约50μl), 加B液一滴(约50μl), 37℃避光显色15分钟。            
每孔加终止液一滴(约50μl),终止反应。用空白孔调零,于450nm波长酶标仪上读取OD值。
 
 
 
 
 
 
 
四、结果判断:
 
以各标准的OD值(扣除NSB)为纵轴(log对数坐标),浓度为横轴(log对数坐标),在双对数坐标纸上绘制标准曲线,在标准曲线上查出待测标本的TSH含量(μIU/ml);或用标准物的浓度值与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,根据样品的OD值,计算出样品的浓度。
方程式为:logOD=Blog[浓度]+A
 
五,正常参考值:
 
TSH:单位μIU/ml
范围值:0.5~5.0μIU/ml
质控血清参考值(单位:μIU/ml)
中值(M) :3.11~4.21
高值(H) :7.16~9.68
 
六、质量控制
 
1)   灵敏度:0.15μIU/ml
2)   精密度:批内变异系数:(CV<5%)
批间变异系数:(CV<15%)
3)   热稳定性:2~8℃储存,有效期一年;
 
七、注意事项:
 
1、试剂盒宜存放于2~8℃。
2、预包被板须密封防潮。
3、做实验前必须将试剂盒恢复至室温,加试剂前应先摇匀,加样中应避免交叉污染。
4、不同批号试剂不能混用。
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