细胞培养所有过程及常见问题

细胞培养是科研入门基础实验，必须掌握。对于已经掌握了的人来说，细胞培养很简单；然而对于还没有入门的人来说，不知所言。对于实验小白来说首先要了解细胞来源，哪里购买细胞株，细胞培养的相关设备，细胞培养试剂的使用与选择等；而对于老司机来说，需要知道如何鉴定细胞污染以及如何处理细胞濡染，如何选择合适的血清和培养基，消化细胞胰酶的选择以及用量等等常见问题。

先谈谈自己细胞培养过程的一些经验。

1.细胞株的购买：细胞株最好到正规的公司购买，如ATCC，中科院细胞库（北京，上海，武汉等地都要细胞库）。最主要的是现在很多杂志发表文章，要求提供细胞鉴定书，所以购买细胞的时候一定要问清楚是否会提供细胞鉴定书。

2.培养基及血清选择：最好选择进口的，尤其是比较难养的细胞，更需要进口试剂培养。国产试剂对于有些细胞也可以使用，但是大部分国产试剂纯度没有进口的好。血清强烈建议使用进口血清，血清是细胞营养的重要部分，很多细胞养不活就是血清不好。不要贪便宜买不正规的血清，一分钱一分货。我们搞科研要得到可靠的结果，首先就要保证培养过程没有问题，不要因为经费紧张去省钱买不好的血清，因为血清不好导致实验做不好实在是没有必要，浪费时间又没做出结果。

3.细胞消化：加入胰酶消化细胞覆盖细胞即可，没必要加过多胰酶，浪费资源。25cm^2培养瓶中加500ul足够了，甚至更少。很多新手担心消化不下来，加入大量胰酶，实在是没有必要。

4.消化后离心：消化后是否需要离心？对于刚刚复苏的细胞，复苏过程需要离心去除细胞冻存保护剂DMSO等，DMSO在低温可保护细胞，但是在常温确有毒性，会损伤细胞生长。复苏的细胞传第一、二代时需要离心，把胰酶和坏死细胞去掉。等细胞传代稳定后，通过优胜劣汰，存活下来的细胞都是质量比较高了，那么在以后传代过程可以不用每次都离心，加入胰酶消化后，观察到细胞开始从培养瓶壁脱落下来，就把胰酶吸出来，加入完全培养基终止消化，这个被终止消化的细胞悬液可以直接用于传代，不要离心。因为离心也是一把双刃剑，离心在去除胰酶的同时，也会损伤细胞。当然最好间隔几次传代后，终止消化的细胞悬液定期离心，因为一直不离心也不太好。总之掌握一个度吧。

5.细胞冻存：对于肿瘤细胞，因为其生长能力比较强，可以采用加入1ml冻存液，按照 7：2：1或者5：4：1配置冻存液。即7份完全培养基：2份血清：1份DMSO或者即5份完全培养基：4份血清：1份DMSO。对于其他细胞株按照以上比例冻存也可以，最好按照9：1配置，即9份血清：1份DMSO。一小瓶可以冻存一管细胞。

6.污染的细胞处理：建议扔掉，包括近期用于细胞培养配置的所以培养基。污染的细胞要拯救过来，挺麻烦的，何况污染后细胞性质可能就变了。至于如何拯救污染的细胞，大家可以在园子里搜索，园子里有很多相关资料。

以上是个人经验，仅供参考。如有异议，欢迎留言讨论。

以下资料是本人通过综合网络资源，整理出来细胞培养相关问题。希望对大家有帮助和借鉴意义。