[PMID:20818791、21041647、22190370、 27791037]
①C57BL/6J小鼠,2.1%异氟醚麻醉、皮下注射0.1mg/kg丁丙诺啡镇痛;
②在左后掌背侧刮除上表皮,0.5%葡萄糖酸氯己定和70%异丙醇消毒后,在胫骨外侧的皮肤和筋膜上作纵向切口,露出骨头;
③在胫骨近三分之一处钻一个0.5mm的孔,插入0.38mm直径的髓内不锈钢固定线,分离腓骨及胫骨周围肌肉,周向剥离骨膜10mm;
④在胫骨中、远端三分之一处用剪刀截骨,产生骨折后,冲洗伤口,用8/0聚丙烯缝线缝合皮肤;
⑤皮下注射0.5 ml生理盐水补充手术中的脱水。放在温暖的盒子里恢复,从麻醉诱导到恢复整个过程持续15±5分钟。
①ELISA检测炎症因子
②水迷宫检测逃逸潜伏期、跨平台数
③条件性恐惧实验:静止减少
④TUNEL法检测海马神经元凋亡
⑤抗CD11b小胶质细胞
①体内血栓形成:
静脉注射二磷酸腺苷溶液(250 mg/kg)诱导急性肺栓塞。[PMID:31438579] 麻醉小鼠,通过尾静脉注射溶有2500单位/kg凝血酶的生理盐水100μl,模型成活率约为80%,30min后处死小鼠。[PMID:27138487]
②体外血栓形成:
实验前一天,从C57BL/6小鼠尾巴上取200 μl血浆,与50 μl凝血酶和CaCl2混合。将混合物加入到内径1.2 mm的玻璃导管中,室温下稳定10分钟,37℃水浴30分钟,4℃过夜形成自体血栓,使用前将血栓切成1毫米长的块。麻醉小鼠,将约30个自体血栓和0.4 mL生理盐水注入右颈静脉,注射1小时、1天和2天后处死小鼠,收集肺组织。[PMID:20660099]
①血小板特异性表位CD41的免疫组织化学检测肺血管内血栓栓塞形成。
②每个肺叶平均肺栓塞数
③Masson stain组织学分析显示大量血栓栓子
①化学诱导肝纤维化
硫代乙酰胺(TAA):每周三次腹腔注射100 mg/kgTAA,注射8周。[PMID:29721568]
四氯化碳(CCl4):每周三次腹腔注射2 ml /kg 10% CCl4 ,共8周。
②胆管结扎肝纤维化
无菌条件下,异氟烷麻醉小鼠,腹中线切开2厘米,分离胆管、门静脉和肝动脉,用两根5-0缝线进行胆管结扎手术,去除多余的缝线,生理盐水冲洗腹腔,缝合中线,给予镇痛药物治疗,温暖环境恢复,在术后第1、3、10和21天进行指标检测。[PMID: 28194023]
①小鼠体重
②肝脏重量
③肝重/体重
⑤H&E染色部分肝细胞急性坏死和空泡化,并伴有炎性细胞浸润。
⑥Masson trichrome stain和天狼星红染色进行检测胶原蛋白在肝脏的分布,并估计肝纤维化程度。
⑦ELISA检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)
⑨ELISA检测TNF-α、IL-1β、IL-6
①Ad-Cre重组腺病毒诱导
6 - 8周龄的Lox-Stop-Lox KRasG12D小鼠用麻醉,室温下吸入AdCre-CaC(60 μl MEM, 2.5 μl AdCre (1010 pfu/ ml) 0.6 μl CaCl2 (1 M)重组腺病毒20 min。[PMID:21317887]
②HE染色:野生型肺的表面光滑而均匀,Lox-Stop-Lox KRasG12D肺4周后表面呈鹅卵石状,产生肺癌病变[PMID: 11751630]
①活体成像
②HE染色
①7-8 周DBA2/J小鼠用低剂量链脲佐菌素(STZ)连续注射5天,测量6小时空腹血糖来评估糖尿病的发病情况。
②每两周用血糖仪测量血糖,每周记录体重、食物和水的摄入量,空腹血糖200 mg/dl即为糖尿病。
③糖尿病发病15周后,用异氟烷麻醉小鼠,采集血液和肾脏进行分析。[PMID:29309903]
①代谢笼进行24小时的尿液收集,测定尿量、pH、尿蛋白及肌酐量
②空腹血糖水平
③体重
④HE染色箭头表示浸润细胞
⑤PAS染色检测肾小球系膜基质扩张
⑥天狼星红染色
⑦胶原蛋白IV
①葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导急性结肠炎:
②10周龄C57BL/6 m小鼠在饮用水中连续5天接受2%的DSS,监测体重减轻情况。[PMID:25479760]
③2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导急性结肠炎:
④8周大的雄性GPR109a /和野生型(WT) C57BL/6小鼠,然后,3.5mg的TNBS溶于100μL30%乙醇中,大约3厘米导管通过肛门进入结肠。[PMID:29627390]
①体重
②HE染色:淋巴细胞大量浸润,正常结构破坏
③检测炎症因子
①动物模型实验方法多样,需根据课题要求构建;
②术后认知功能障碍动物模型:头部/脾脏/阑尾手术、纯麻醉肺癌模型:肿瘤细胞系移植模型、人源肿瘤组织异种移植模型;
③检测指标多样:可多指标检测验证建模是否成功;
④行为学:水迷宫、糖偏好、矿场、条件性恐惧;
⑤组织病理:HE染色、 Masson染色、天狼星红染色;
⑥生化:TNFα 和IL-1β 和 IL-6 等炎症因子;
⑦细胞:神经元凋亡,小胶质细胞活化等。
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