1、技术原理:
重组腺病毒(AdV)是人血清5型腺病毒(Ad5),一种复制缺陷的腺病毒载体系统,在基因治疗、基础生命科学研究等领域被广泛应用。腺病毒缺失了早期表达基因序列E1和E3区。E1是腺病毒复制所必须的,E1的缺失使其不能自身复制,只能依靠包装细胞如293A细胞提供的反式互补进行复制扩增,以此保证腺病毒的安全性。E3基因表达的蛋白能对抗宿主的抗病毒防御系统,E3区的去除能减少宿主的体液免疫反应。
腺病毒(Adenovirus)是一种线性双链DNA无包膜病毒,对分裂期细胞和非分裂期细胞均具有感染能力,且具有嗜上皮细胞性。重组腺病毒载体是以腺病毒为基础发展起来的工具病毒载体,它可通过受体介导的内吞作用进入细胞内,但腺病毒基因组不整合进入宿主细胞基因组中。腺病毒作为一种常用的基因操作工具,在心血管领域、肝脏、肌肉、肺、肿瘤及其他领域广泛应用。
2、技术优势:
腺病毒与其他病毒工具比较,具有以下优势:
① 宿主范围广:腺病毒可感染分裂和非分裂细胞,并且感染后24-48小时即可表达,是研究原代非增殖细胞基因表达的最佳系统。
② 滴度高:腺病毒系统在转有 E1 基因的 293A 细胞中可进行自我复制,可产生滴度为1010~1011pfu/ml的病毒。
③ 载体容量大: 可容纳不超过5kb 的片段。
④ 不整合到染色体中,无插入致突变性:腺病毒除卵细胞以外,几乎在所有已知细胞中都不整合到染色体中,因此避免了因整合而引发的潜在的基因突变和随机效应 。
3、质量控制:
① 基因序列测序
② 载体酶切鉴定
③ 超速梯度离心和过滤,并通过壳蛋白免疫法进行滴度测定
④ 一般情况下,腺病毒的滴度在1010~1011pfu/ml
4、应用:
细胞感染:腺病毒可有效感染肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、神经元细胞、干细胞等多种类型的细胞;在心血管领域、肝脏、肌肉、肺、肿瘤及其他领域广泛应用。
体内注射:心脏、肝脏、肺、胰腺、神经系统
DNA 病毒图片来源百度
※腺病毒颗粒经过超速梯度离心和过滤,并通过壳蛋白免疫法进行滴度测定。腺病毒的滴度在10^10~10^12pfu/ml,完全可以满足各类实验的使用要求。可以提供的服务如下:
①基因过表达腺病毒服务
②基因干扰腺病毒服务
③ MicroRNA研究腺病毒服务