值得注意的是 PCR 方法需要以 U6 为对照。U6 是一类 snRNA,由 RNA 聚合酶 III 转录,主要形成小核糖核蛋白颗粒,定位于细胞核内,表达稳定。由于长度和前体 miRNA 接近,200 bp 左右,在组织中稳定高表达,本身也不涉及 miRNA 调节途径,是优良的内参选择。
但有时我们也会遇到 PCR 检测 miRNA 含量没有明显差异的情况。先别惊慌,由于 miRNA sponge 本质是竞争结合而非完全降解,宿主中 miRNA 存在被 PCR 检测的风险。这个时候,我们可以检测 miRNA 靶基因,如果靶基因表达明显上调,也能说明 miRNA 沉默成功。
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