【原创】【精华】条件性基因敲除(flox)小鼠繁育策略

条件性基因敲除(flox)小鼠繁育策略Mating Strategy forConditional Knock-Out (flox) Mouse上海南方模式生物研究中心技术顾问周效华[深夜吐血整理，有一无二]? Mating Strategy
l How to make a choice in Cre Zoo
l How to do the mouse breeding
l How to do the mouse genotyping

l How to make a choice in Cre Zoo
“Cre-zoo” 工具鼠库之广泛——Flp；EIIa-cre；UBC-cre/ERT2
“Cre-zoo” 工具鼠库之肝脏——Alb-cre；Alb-CreERT2
“Cre-zoo” 工具鼠库之神经系统——Camk2a-cre；Camk2a-cre/ERT2
“Cre-zoo” 工具鼠库之神经系统——Gfap-cre；Nes-cre；Nes-cre/ERT2；
“Cre-zoo” 工具鼠库之神经系统——Drd1a-cre；Drd2-cre
“Cre-zoo” 工具鼠库之生殖——Amhr2-Cre；Prm-Cre；Amh-cre；Lcn5-Cre
“Cre-zoo” 工具鼠库之脂肪——Fabp4-cre
“Cre-zoo” 工具鼠库之视网膜——Vsx2-cre
“Cre-zoo” 工具鼠库之胰岛——Ins2-cre；Ins2-cre/ERT
“Cre-zoo” 工具鼠库之肠——Vil1-cre
“Cre-zoo” 工具鼠库之乳腺——MMTV-cre
“Cre-zoo” 工具鼠库之心肌、骨骼肌——Myh6-MerCreMer; Ckmm-cre
“Cre-zoo” 工具鼠库之内皮Tek-cre
“Cre-zoo” 工具鼠库之上皮细胞CYP1A1-Cre
“Cre-zoo” 工具鼠库之肺上皮细胞——SFTPC-rtTA/tetO-cre
“Cre-zoo” 工具鼠库之T细胞——Lck-cre/Cd4-cre
“Cre-zoo” 工具鼠库之B细胞——CD19-Cre
“Cre-zoo” 工具鼠库之骨髓细胞——Lyz2-cre
“Cre-zoo” 工具鼠库之树突DC 细胞——Itgax-cre
“Cre-zoo” 工具鼠库之发育(干扰素响应)——Mx1-cre
“Cre-zoo” 工具鼠库之造血干细胞，骨髓——Ly6a-CreERT
“Cre-zoo” 工具鼠库之胚胎和干性细胞——Pou5f1-CreERT
“Cre-zoo” 工具鼠库之四肢——Shh-cre/ERT2
……
具体信息请参考附件文件，欢迎无私捐赠或交换
l How to do themouse breeding
条件性基因敲除小鼠去Neo繁育条件性基因敲除小鼠转为全身性基因敲除繁育

1. F1代杂合(未去Neo或去Neo)flox小鼠（Gene X^flox-Neo/+ or Gene X^flox/+ ）；
2. 与全身表达（Flp或EIIa-Cre）小鼠交配（去除neo基因或指定外显子）；
3. 与野生型小鼠交配去除（Flp或EIIa-Cre）基因。
具体图示请参考附件文件
条件性基因敲除小鼠繁育准备

1. F1代杂合(去Neo)flox小鼠（Gene X^flox/+ ）自交获得纯合flox小鼠（Gene X^flox/flox ）。
2. F1代杂合(去Neo)flox小鼠（Gene X^flox/+ ）与组织/细胞特异表达Cre小鼠交配获得杂合(去Neo)flox，Cre阳性小鼠（Gene X^flox/+;Cre⁺）。
具体图示及原理请参考附件文件
l How to do the mouse genotyping
具体图示及原理请参考附件文件
繁育计划

1. Cre和flox是否连锁？
2. 是否只需雄性小鼠？
3. 是否必须同窝对照？
4. 如何根据繁育目标推演制定合理的繁育计划？
举例：
按条件敲除方案一，确认不连锁，如最终需要10只flox/flox;Cre雄性同窝小鼠，那么至少要出生80只（事实上可能需要120-160个）以上小鼠，至少需要24-32只母鼠同时怀孕。
繁育管理

1. Excel 表格（具体表格模板请参考附件文件）
2. 专业管理系统