【原创】【精华】条件性基因敲除(flox)小鼠繁育策略
条件性基因敲除(flox)小鼠繁育策略Mating Strategy forConditional Knock-Out (flox) Mouse上海南方模式生物研究中心技术顾问周效华[深夜吐血整理,有一无二]?
Mating Strategyl
How to make a choice in Cre Zool
How to do the mouse breedingl
How to do the mouse genotyping
l
How to make a choice in Cre Zoo
“Cre-zoo” 工具鼠库之广泛——Flp;EIIa-cre;UBC-cre/ERT2
“Cre-zoo” 工具鼠库之肝脏——Alb-cre;Alb-CreERT2
“Cre-zoo” 工具鼠库之神经系统——Camk2a-cre;Camk2a-cre/ERT2
“Cre-zoo” 工具鼠库之神经系统——Gfap-cre;Nes-cre;Nes-cre/ERT2;
“Cre-zoo” 工具鼠库之神经系统——Drd1a-cre;Drd2-cre
“Cre-zoo” 工具鼠库之生殖——Amhr2-Cre;Prm-Cre;Amh-cre;Lcn5-Cre
“Cre-zoo” 工具鼠库之脂肪——Fabp4-cre
“Cre-zoo” 工具鼠库之视网膜——Vsx2-cre
“Cre-zoo” 工具鼠库之胰岛——Ins2-cre;Ins2-cre/ERT
“Cre-zoo” 工具鼠库之肠——Vil1-cre
“Cre-zoo” 工具鼠库之乳腺——MMTV-cre
“Cre-zoo” 工具鼠库之心肌、骨骼肌——Myh6-MerCreMer; Ckmm-cre
“Cre-zoo” 工具鼠库之内皮Tek-cre
“Cre-zoo” 工具鼠库之上皮细胞CYP1A1-Cre
“Cre-zoo” 工具鼠库之肺上皮细胞——SFTPC-rtTA/tetO-cre
“Cre-zoo” 工具鼠库之T细胞——Lck-cre/Cd4-cre
“Cre-zoo” 工具鼠库之B细胞——CD19-Cre
“Cre-zoo” 工具鼠库之骨髓细胞——Lyz2-cre
“Cre-zoo” 工具鼠库之树突DC 细胞——Itgax-cre
“Cre-zoo” 工具鼠库之发育(干扰素响应)——Mx1-cre
“Cre-zoo” 工具鼠库之造血干细胞,骨髓——Ly6a-CreERT
“Cre-zoo” 工具鼠库之胚胎和干性细胞——Pou5f1-CreERT
“Cre-zoo” 工具鼠库之四肢——Shh-cre/ERT2
……具体信息请参考附件文件,欢迎无私捐赠或交换l
How to do themouse breeding条件性基因敲除小鼠去Neo繁育条件性基因敲除小鼠转为全身性基因敲除繁育 - F1代杂合(未去Neo或去Neo)flox小鼠(Gene Xflox-Neo/+ or Gene Xflox/+ );
- 与全身表达(Flp或EIIa-Cre)小鼠交配(去除neo基因或指定外显子);
- 与野生型小鼠交配去除(Flp或EIIa-Cre)基因。
具体图示请参考附件文件
条件性基因敲除小鼠繁育准备
- F1代杂合(去Neo)flox小鼠(Gene Xflox/+ )自交获得纯合flox小鼠(Gene Xflox/flox )。
- F1代杂合(去Neo)flox小鼠(Gene Xflox/+ )与组织/细胞特异表达Cre小鼠交配获得杂合(去Neo)flox,Cre阳性小鼠(Gene Xflox/+;Cre+)。
具体图示及原理请参考附件文件
l How to do the mouse genotyping
具体图示及原理请参考附件文件
繁育计划
- Cre和flox是否连锁?
- 是否只需雄性小鼠?
- 是否必须同窝对照?
- 如何根据繁育目标推演制定合理的繁育计划?
举例:
按条件敲除方案一,确认不连锁,如最终需要10只flox/flox;Cre雄性同窝小鼠,那么至少要出生80只(事实上可能需要120-160个)以上小鼠,至少需要24-32只母鼠同时怀孕。
繁育管理
- Excel 表格(具体表格模板请参考附件文件)
- 专业管理系统
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