细胞的分裂指数测定

一、原理
体外培养细胞生长、分裂繁殖的能力，可用分裂指数来表示。它与生长曲线有一定的联系，如随着分裂指数的不断提高，细胞也就进入了指数生长期。
分裂指数指细胞群体中分裂细胞所占的百分比，它是测定细胞周期的一个重要指标，也是不同实验研究选择细胞的重要依据。
二、仪器、用品与试剂
1、仪器与用品：CO2培养箱、普通显微镜、细胞培养血、盖玻片、吸管
2、试剂：培养液、胰酶、甲醇、冰醋酸、Giemsa染液
三、操作步骤
1、消化细胞，将细胞悬液接至内含盖玻片的培养皿中。
2、CO2培养箱中培养48小时，使细胞长在盖片上。
3、取出盖片，按下列顺序操作：
PBS漂洗3分钟→甲醇：冰醋酸=3：1固定液中固定30分钟→Giemsa液染色10分钟→自来水冲洗。
4、盖片晾干后反扣在载玻片上，镜检。
5、计算:
分裂指数=分裂细胞数/总细胞数×100%
四、注意事项
操作时动作要轻，以免使盖片上的细胞脱落。
附：Giemsa染液配制：
称Giemsa粉末0.5克，加几滴甘油研磨，再加入甘油（使加入的甘油总量为33ml）。56℃中保温90—120分钟。加入33ml甲醇，置棕色瓶中保存，此为Giemsa原液。
使用时按要求用PBS稀释。一般稀释10倍。