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浅谈 PCT 检测方法

降钙素原(PCT)是无激素活性的降钙素前体物质,由 116 个氨基酸组成的糖蛋白,结构上,包括降钙蛋白、降钙素和 N 端残基片段。生理情况下,PCT 主要由甲状腺 C 细胞合成分泌,健康成人血清 PCT 水平很低,通常小于 0.05 μg/L[1]。在细菌感染时,体内促炎因子诱导甲状腺以外的组织(如肝脏、肺、肠道等)大量合成 PCT 分泌入血,导致血清 PCT 水平显著升高 [2]

PCT 在细菌感染引起的全身性炎症反应早期 2-6 h 即可升高,12 h 达峰,半衰期为 20-24 h[3]。临床上,PCT 浓度对严重细菌感染的早期诊断、判断病情严重程度、预后、评价抗感染疗效、指导抗菌药物应用等方面都具有较高的临床价值 [4]

目前实验室常用的 PCT 检测方法(附表)包括:电化学发光法、酶联免疫荧光法、和免疫层析法(胶体金)、乳胶增强免疫比浊法等。

四种常见检测方法 ●


电化学发光法


电化学发光法,是在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应,用电化学发光剂三联吡啶钌 [Ru(bpy)3]2+标记 Ab,通过 Ag-Ab 反应和磁珠分离技术,根据三联吡啶钌在电极上发出的光强度对待测的 Ag 或 Ab 进行定量/定性。


酶联免疫荧光法


酶联免疫荧光法是指样品中的受检物质与固定的抗体或抗原结合。通过洗板除去非结合物,再加入酶标记的抗原或抗体,通过加入与酶反应的底物后显色,根据颜色的深浅测量受检物质的含量。


胶体金免疫层析法


胶体金免疫层析法,是将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上,胶体金标记试剂吸附在结合垫上,当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后,通过毛细作用向前移动,溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应,再移动至固定的抗原或抗体的区域时,待检物与金标试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留,聚集在检测带上,可通过肉眼观察到显色结果 [5]。 

上述三种 PCT 检测方法中,前两者属于定量检测,具有较高的敏感度、特异度和精密度。其中电化学发光法是全自动检测,检测通量高,检测时间短。酶联免疫荧光法为半自动检测,检测通量较低,单次检测的时间相对较长。免疫层析法(胶体金)属于半定量检测,在床旁检测(POCT)中较为常用,操作便捷,机器小型便捷,样本周转时间短,但精密度较低,CV 值较大 [6]


采用乳胶增强免疫比浊法


此外,临床检测中也有试剂采用乳胶增强免疫比浊法,此方法中,聚苯乙烯颗粒表面修饰有抗体,当检测样品中有 PCT 存在时,基于免疫沉淀反应原理形成不溶性免疫复合物 [7]此方法成本低,性能和操作也较符合临床应用需求。

PCT 检测的溯源性关系到结果判读的准确性。溯源性是指通过一条已知不确定度的不间断的比较链,使检测结果或标准值与规定的参考标准联系起来的特性。目前国外主流的 PCT 检测公司使用相同的抗体和制备标准,因此其检测结果具有可溯源性、较高的相关性与一致性。其中罗氏诊断 PCT 检测系统以 BRAHMS PCT115 为溯源链顶端,其准确性,精密度等各项性能均得到广泛认可 [8]。 

附表 不同实验室降钙素原检测方法比较

参考文献

1.Lippi G, Sanchis-Gomar F. Procalcitonin in inflammatory bowel disease: Drawbacks and opportunities. World J Gastroenterol. 2017;23(47):8283-8290.

2.Linscheid P, Seboek D, Nylen ES, et al. In vitro and in vivo calcitonin I gene expression in parenchymal cells: a novel product of human adipose tissue. Endocrinology. 2003;144(12):5578-5584.

3.Meisner M. Pathobiochemistry and clinical use of procalcitonin. Clin Chim Acta. 2002;323(1-2):17-29.

4.中国医药教育协会感染疾病专业委员会.感染相关生物标志物临床意义解读专家共识.中华结核和呼吸杂志.2017;40(4):243-257.

5.https://www.biomart.cn/experiment/430/502/519/521/18180.htm

6.蔺亚晖, 程军, 于金星, 等. 两种检测方法测定降钙素原的精密度验证及比对研究. 标记免疫分析与临床. 2016; 23(7): 829-833.

7.杨泽权. 降钙素原乳胶增强免疫比浊法与免疫荧光法的相关性. 国际检验医学杂志,2016;,37(3):416-417.

8.吴金斌,郑若洋,欧嘉文.定量检测降钙素原的方法学评价.检验医学与临床,2015;12(06): 780- 782.

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