令人瞩目的是，2018年2月20日，由军医大学海军（原第二军医大学）张卫东教授课题组联合剑桥大学樊台平教授发表了最新研究“肉桂醛通过上调PI3K和MAPK通路促进血管新生，从而加速伤口愈合”，相关研究成果发表在《Nature》杂志旗下子刊《Laboratory Investigation》上，为麝香保心丸促进血管新生提供了新的证据。我们将分别从体外实验和体内实验两部分的结果为您仔细解读这项成果。
解读：麝香保心丸由蟾酥、冰片、麝香、牛黄、苏合香、肉桂和人参七味中药组成，肉桂可作用于血管，促进血管新生、促进血液循环和血管损伤的愈合。然而，肉桂的有效成分和作用机制还未完全阐明。张卫东教授课题组联合樊台平教授进行肉桂醛促进血管新生、加速损伤愈合的研究，有力地验证了肉桂醛是麝香保心丸中具有促进治疗性血管新生作用的药效物质，其作用机制与激活PI3K和MAPK信号通路相关，这是麝香保心丸促血管活性成分及作用机制深入研究的最新成果。《Laboratory Investigation》杂志在2018年6月份更新的SCI影响因子达到4.3分。
英文题目：
Cinnamaldehyde accelerates wound healing by promoting angiogenesis via up-regulation of PI3K and MAPK signaling pathways[1]
发表杂志：Laboratory Investigation
合作单位：军医大学海军（原上海第二军医大学） 英国剑桥大学 上海中医药大学
影响因子：4.3
发表时间：2018
体外研究
输
1.肉桂醛能够促进HUVEC(人脐静脉内皮细胞)增殖、迁移、伤口愈合以及管腔形成。
心肌新生血管主要是微动脉血管，血管生成是通过分化完全的血管内皮细胞从血管中增殖、迁徙和重塑而成，可以通过体外血管形成实验来检测。该项研究用肉桂醛刺激人脐静脉内皮细胞，CCK-8试验（增殖实验）检测细胞增殖能力，划痕实验检测细胞迁移能力，发现肉桂醛能够有效促进HUVEC的增殖和迁移能力，促进伤口愈合，并呈现剂量和时间依赖性。用流式细胞术检测其对细胞凋亡的影响，发现有效范围内对细胞不具有毒性。
微血管生成的过程需要内皮细胞重构和聚集，该过程也可以通过体外微管形成实验检测到。经过4 h的培育，肉桂醛可显著诱导HUVEC管腔形成。经过12 d体外血管形成实验，用HUVEC接种于成纤维细胞床中，初步筛选结果显示，肉桂醛可促进同型半胱氨酸诱导损伤的血管生成。
解读：新生血管主要成分是内皮细胞，HUVEC常被用于体外研究人内皮细胞的功能。该部分在体外细胞水平证实了肉桂醛能够有效促进内皮细胞的增生，伤口愈合，从而促进血管新生，另外，在有效范围内，没有细胞毒性，表明了其具备很强的安全性。这为麝香保心丸促进治疗性血管新生作用机制提供了重要依据。
输
2.肉桂醛能够促进VEGF(血管内皮生长因子)的分泌，并激活PI3K/AKT和MAPK信号通路。
VEGF是重要的内皮细胞生长因子，其分泌可能与血管新生密切相关。酶联免疫吸附结果显示，肉桂醛以时间和浓度依赖性方式诱导HUVEC分泌VEGF，并在10μM浓度和48h处理时间时，显示出最大效应。
（图片来自网络）
已知MAPK信号通路经RAF→MEK→ERK级联激活，ERK1/2是主要分子靶点之一,RAf/MEK/ERK信号通路参与细胞增殖，并对伤口愈合过程中的促进血管生成起关键作用。该项研究表明，肉桂醛能够诱导ERK磷酸化从而促进HUVEC血管生成。P38 MAPK信号可以充当血管生成和高渗透性之间的“分子开关”，改善内皮细胞运动性。研究发现，肉桂醛以时间和浓度依赖性方式诱导P38磷酸化。
另一个控制内皮细胞血管生成过程的中心途径是PI3K/AKT信号通路。AKT磷酸化可激活内皮型一氧化氮合酶（eNOS），产生调节血管舒张、血管重塑和血管生成的物质NO。体外研究显示，5μM浓度肉桂醛即可下调脂多糖刺激的巨噬细胞的诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和NO释放。与eNOS不同，iNOS产生大量NO作为免疫应答的一部分，并且可能影响VEGF诱导的血管通透性和血管生成。抑制iNOS可预防血管慢性伤口的进一步炎症损伤。
解读：该部分在体外分子水平阐述了肉桂醛能够通过促进VEGF的分泌，和激活PI3K/AKT和MAPK信号通路来促进内皮细胞血管生成，发现了肉桂醛促进血管新生的新的分子机制，从而为麝香保心丸促进血管新生分子机制提供了重要证据。
以上表明，肉桂醛可浓度依赖性诱导AKT及其下游蛋白eNOS磷酸化，以及MAPK信号通路磷酸化，即麝香保心丸可通过PI3K/AKT和MAPK信号通路，对血管新生有浓度依赖性促进作用。该部分从药理学角度出发，通过体外细胞实验论证药物疗效的确切性和作用的机制，证实麝香保心丸具有促进治疗性血管新生的作用。
体内实验
输
1.肉桂醛能够逆转PTK787对斑马鱼节间血管生成的抑制作用。
转基因斑马鱼血管损伤模型常用于评价肉桂醛对促血管新生的影响。PTK787为血管生长因子受体酪氨酸激酶选择性抑制剂，能够拮抗斑马鱼的节间血管的生成。加入不同浓度的PTK787溶液处理3 h后，发现其剂量依赖性损伤斑马鱼节间血管。当给予浓度分别为0.01μg/mL、0.05μg/mL和0.1μg/mL的肉桂醛24h后，发现其对PTK787损伤的斑马鱼节间血管具有显著的促进生成作用，表明肉桂醛能够逆转PTK787对斑马鱼节间血管生成的抑制作用。
解读：斑马鱼常被用于研究血管新生；该部分在体内水平，即斑马鱼身上证实肉桂醛促进血管新生的作用，能够有效逆转PTK787对血管生成的抑制。在体内水平上的验证，更加证实了麝香保心丸的疗效。
输
2.肉桂醛能够加速体内血管生成。
为进一步证实肉桂醛在体内的促血管新生作用，该项研究采用小鼠基质栓塞模型进行实验(基质栓塞部位用生理盐水处理后会呈现苍白色，表明几乎没有小血管生成)。与生理盐水处理的对照组相比，肉桂醛组小鼠基质栓塞部位出现红色，表明肉桂醛具有促体内血管生成作用。同时，基质栓塞部位的血红蛋白含量也证实了肉桂醛具有促血管生成作用，研究结果显示，与对照组相比，肉桂醛组血红蛋白水平明显升高，达到3.2 g/dL（P<0.05），是对照组的1.7倍。进一步通过HE染色和CD31免疫组化染色证实，与对照组相比，肉桂醛组出现更多的毛细血管样结构、新生血管和血管壁增厚现象。
解读：该部分进一步在体内水平，即小鼠身上证实肉桂醛的促血管新生作用，相比斑马鱼，啮齿类动物小鼠与人体有更高的相似性，表明肉桂醛在体内具有更确切的作用，为麝香保心丸的促进血管新生作用提供了新的证据。
以上通过在体水平（斑马鱼和小鼠）论证了肉桂醛的促血管新生作用，在体水平更贴近人体，众所周知，小鼠基因与人的基因具有极高的同源性。该部分结果结合体外细胞实验对于细胞水平和分子水平的验证，证实了肉桂醛能够有效促进血管新生，相关成果发表在国际权威杂志，这为临床上麝香保心丸治疗急性心肌梗死提供新的理论依据。
麝香保心丸循证项目介绍
麝香保心丸作为一种治疗心血管疾病的代表中成药已临床应用三十余年，具有芳香温通、益气强心的功效，用于治疗由心肌缺血引起的心绞痛、心肌梗死等。麝香保心丸在促血管新生的研究方面较多，伴随血管新生分子生物机制研究的深入，为缺血性疾病治疗带来了新的希望。为了得到更多证据支持和证实，2011年，麝香保心丸正式启动了大型“随机、双盲、多中心、安慰剂平行对照评估麝香保心丸治疗慢性稳定性冠心病临床转归的临床研究”，通过不同终点事件、危险因素控制、药物依从性调查等指标评价麝香保心丸联合标准药物治疗，对于慢性稳定性冠心病患者临床转归的影响。麝香保心丸的循证医学项目，不仅仅是为了推广循证医学，同时也是借循证医学将传统中医和中药发扬光大，科学结合西方和东方的医学精髓，给患者更有效、更安全的治疗。
参考文献
[1]Yuan X, Han L, Fu P, et al. Cinnamaldehyde accelerates wound healing by promoting angiogenesis via up-regulation of PI3K and MAPK signaling pathways. Laboratory investigation. 2018（Jun）；98：S783-S798.
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