Primer Premier 5.0引物设计

PCR引物设计
⑴ 确定PCR产物片段大小
⑵ 确定引物所在区段
⑶ 确定引物序列的长度范围
⑷ 确定引物Tm（melting temperature）值范围

PCR引物设计原则

• 引物长度以15-30bp为合适的
• 引物里面的GC含量在40-60%之间是最好的
• 引物里面的ATCG分布应遵守随机性，避免连续出现4个以上的单一的碱基，尤其在引物的3端不应该出现连续的G/C
• 引物要求自身不能含有互补序列，否则这个引物自身会形成发夹一样的二级结构，影响PCR作用效果
• 两个引物之间不应该有多于4个的互补/同源的碱基，否则会形成引物二聚体
• 引物的3' 端是G/C

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Primer Premier 5.0软件设计引物

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