肌肉卫星细胞的分离纯化_中科博生

  

具中科博生研究发现，卫星细胞因其位于基膜和肌细胞膜之间,紧贴细胞表面而得名。

Bischoff 研究证明胶原酶并不能将这类细胞从基膜上消化下来,只有胰蛋白酶和链霉激酶有 此功能。但是,可以采用两步消化法,先用胶原酶消化,充分分散肌纤维以强化 下一步胰蛋白酶的作用。中科博生。

细胞的分离

①大鼠用1%戊巴比妥钠腹腔麻醉后,无菌条件下取出前肢三头肌,用DHanks液冲洗3遍,解剖镜下尽可能剔除脂肪、血管等结缔组织;中科博生。

②冲洗1次,将肌肉组织块剪碎（以不大于1mm³为宜）,然后移入离心管中,用DHanks 液反复吹打3遍,每次静置lmin后,均将上层液及其中的漂浮 组织除去;中科博生。

③加人0.1%胶原酶37℃消化30min,500g离心lmin,去上清;中科博生。

④用0.25%胰蛋白酶37℃消化1h（其间吹打数次）,加入含10%胎牛血清的培养基中止,反复吹打,500g 离心lmin后上清液依次滤过100 目、200目、400目不锈钢筛网；中科博生。

⑤重复中止吹打过程4次,滤液收集后250g离心10min,去上清,细胞团|块用10%胎牛血清培养基重悬。中科博生。

细胞的纯化、培养

为减少成纤维细胞的污染,将含细胞的培养液行差速贴壁法纯化,纯化后细胞行台盼蓝染色计数,以不低于10/ml细胞密度种植于已涂 0.01%多聚赖第题的培养瓶中,放人CO,孵箱中培养,以含10%胎牛血清DMEM/F12培养,每日换液1次。

中科博生期待大家一起探讨学习。