技术 | 12345，上山打老虎：细胞计数方法漫谈

作者：解螺旋.毛博

转载请注明来源：解螺旋，医生科研助手

“12345，上山打老虎”这是毛博小时候经常唱的一首童谣，也教会了我怎么数数字。这项技能很重要，多年以后毛博远渡重洋，在米国实验室打工的时候还要经常用到这项技能，那就是细胞计数吧。其实，细胞计数最关键的不是计数，而是计数活细胞。因为在那一大堆细胞里面，肯定有死有活的，只有活的才对我们的实验有意义，是吧？所以，细胞计数最关键的就是首先要鉴别细胞的死活。

细胞计数的实验用品非常非常简单，都是任何一家实验室常备的：0.4%台盼蓝溶液、95%乙醇溶液、普通显微镜、试管、吸管、细胞计数板、绸布。这里的台盼蓝就是用来鉴别细胞死活的。台盼蓝又称为活体染料，不能透过活细胞正常完整的细胞膜，故活细胞不会染上任何颜色。而死亡细胞的细胞膜通透性增高，可使染料进入细胞内而使细胞染上蓝色。

细胞计数的具体步骤如下：

1.计数板处理

用95%乙醇溶液把计数板使劲地擦擦擦后，再用绸布擦干净，再拿一张盖玻片，也用绸布擦干净。最后把盖玻片覆盖在计数板上面。

2.制备细胞悬液

将细胞用生理盐水制备成适当浓度的细胞悬液。再向计数板滴一滴。向计数板中滴细胞悬液时要干净利落，量要适当，过多易使盖片漂移，或淹过盖片，过少则容易出现气泡。这样多算失败。重头再来吧。

3.染色

按与细胞悬液1∶1的比例，用滴管吸取0.4%台盼蓝染液，从计数板边缘缓缓滴入，使之充满计数板和盖片之间的空隙中。不要使台盼蓝染液流到旁边的凹槽中或带有气泡，否则也算失败哈！要重做滴。稍候片刻，将计数板放在低倍镜下（10倍即可）观察计数。

4.计数方法

计算计数板的四角大方格内的细胞数。如下图所示，只计数A、B、C、D这四个大格子里面的细胞哈。计数时，只计数活细胞。镜下观察，凡是亮晶晶的不着色的透明的为活细胞，凡是染上蓝色者为死细胞。若聚成一团的细胞，则只算一个细胞哈。在一个大方格中，如果有细胞位于线上，按照“计下不计上；计左不计右”的原则，即“计下线细胞不计上线细胞，计左线细胞不计右线细胞”。如果不放心的话，可以重复计数2-3次，算一个平均值即可。

5.计数的换算

计完数后，需换算出每ml细胞悬液中的细胞数。 每一大方格内细胞数×10，000＝细胞数/ml，故可按下式计算：细胞悬液的浓度=细胞数/ml＝4个大格细胞总数/4×10，000。如计数前已稀释，可再乘稀释倍数。

好了，计数完毕，打完收工。大家也可以看到，细胞计数不是什么高大上的技术。但是，还是一个非常常用的技术。因为任何涉及到细胞计数的实验，首先就是要确定细胞的浓度和数量。现在有细胞计数仪。可以代替人工细胞计数。不过说句实话，一般不是土豪实验室的话，都没有配备。毛博当年在米国做博士猴的时候，也是用以上的方法人工计数的。人工计数的准确性一点不比细胞计数仪差，而且时间短，费用低，就算是穷人实验室的小米加步枪，效果也不一定比土豪实验室的飞机大炮差。