作者:解螺旋.大厨
转载需授权注来源:解螺旋,医生科研助手
有研究表明肌萎缩侧索硬化症(即ALS,大名鼎鼎物理学家霍金就是罹患此病,前两年的冰桶挑战就是为它而兴起的)等疾病就与RNA及其颗粒组装相关联,想更多研究就赶紧开始RCasing吧 。
从DNA到RNA再到Protein这一中心法则,应该为大家所熟知了,每个元素的变化都会牵一发而动全身。例如,DNA的含量多少(染色体数目的变化可导致唐氏综合症)和其突变可导致各种遗传性疾病和恶性疾病、RNA转录水平变化的作用就更不用说了(最为常见的定量PCR检测对象)以及蛋白水平的变化(几乎大大小小的疾病都与它相关)和其表达位置的改变(常见的免疫荧光染色的目的之一)。
其中,针对RNA的检测,除了利用常规PCR,以及这两年发明的活细胞RNA检测纳米技术检测其表达水平变化(较时髦,想让课题高大上,可以考虑采用该技术,很多公司有试剂盒,为避嫌,就不说牌子了),还可以检测RNA在细胞内的不同位置的变化,当然如何实现这一点,以及实现了这一点又有如何意义,正是本文所要说明的。
在此之前,已经有人尝试利用其它的核苷酸编辑工具编辑并示踪RNA变化,如TALEN(二代核苷酸编辑技术,更早之前的为ZFN----锌指核酸酶)联合分子信标(beacon)或RNA适配体(Aptamer)等,但是这些方法均存在编辑能力有限、方法繁琐并耗时耗力等缺点。为此,在CRISPR/Cas9出现之后,没有理由不尝试采用这一新技术去解决上述的老问题,即示踪体内RNA,因此有了本文的故事。
首先,虽然CRISPR/Cas9是DNA编辑工具,但是2014年有科研小组发现了针对RNA的靶向Cas酶。在此基础之上,作者设计了RCas9,即靶向RNA,而非DNA,同时又将无催化活性的Cas9酶与GFP连接。这样,一旦靶RNA被识别,就会出现GFP绿色信号。
其次,利用RCas9观察了常见基因的mRNAs在细胞内的定位(空间),并与常规RNA定位技术FISH进行了比较。
最后,利用RCas9技术观察了mRNA的动态变化(时间)。
1、该文在Cell的新兴板块Resource发表,更多了说明了文中提到的这一技术RCas9的实际应用价值,希望有公司可以尽快将相关Kit研发出来,推出市场。
2、关于开始提到的问题,既然有能力解决RNA定位的问题了,那么接下来的工作呢,RNA定位的意义在哪里??有研究表明肌萎缩侧索硬化症(即ALS,大名鼎鼎物理学家霍金就是罹患此病,前两年的冰桶挑战就是为它而兴起的)等疾病就与RNA及其颗粒组装相关联,这下明白了吧,赶紧开始RCasing。
全文地址:Cell. 2016 Mar 16. pii:S0092-8674(16)30204-5. doi: 10.1016/j.cell.2016.02.054. Programmable RNA Trackingin Live Cells with CRISPR/Cas9.
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