解螺旋公众号·陪伴你科研的第2714天
如何养死细胞
首先，我要反思下我进实验室的懒惰和侥幸心理，有时候进细胞房懒得换鞋，懒得戴口罩，甚至不戴手套，帽子。
我知道，换鞋是为了隔离真菌。戴口罩是为了防止口腔支原体不会污染细胞。不戴手套，根本就清除不掉手上的细菌真菌，我明知，以上懒惰造成的不规范行为，是细胞房的大忌讳，还故犯，实属罪加一等。
生物安全柜里操作时，门前最忌讳堆一堆杂七杂八的东西，然而，我的枪头盒、血清、管子，培养皿、移液器、酒精喷壶、酒精灯，堆积如山，我承认我没有好好整理它们。
我知道，一旦它们堵住了安全柜门前的出风口，就会有双重不良影响。我试过，这样子实验操作起来会容易手忙脚乱，导致动作幅度过大，扰乱气流。
其次是，这些堆积的实验用品一旦挡住风口，也会扰乱生物安全柜的气流，气流变化会导致外部不洁净的空气流入，也同样会导致生物安全柜的洁净作用失效。
我明知，紫外和酒精最多只能灭细菌，对真菌伤害很小。我不该不戴手套，仅用喷壶喷手。我知道，超净台要尽量要用酒精棉球而不是用酒精喷壶，因为用酒精棉球的话，可以在灭菌的同时把菌体从手上擦下去，而喷壶只能短暂的灭了下菌而已。
所以，我以后一定要改掉这个毛病，多用棉球，少用喷壶。
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我发现，水浴锅是实验室比较容易忽视的一种存在，复苏细胞的时候，37℃对细菌真菌来说就是温床。复苏细胞后，湿漉漉的冻存管，任我再怎么喷酒精也并没有什么意义了。
所以，我发誓以后一定要，定期清洁水浴锅，在清洁时务必加一些抑菌剂。注意：我不是要往里面加双抗，水浴锅里要加2%的硫酸铜，但这比较容易腐蚀水浴锅。总之，一定要定期清洁。
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我深知，培养箱的水盘坐拥37℃温床的水环境，水盘里若是飘着特别大的一块块霉斑，一污染就一箱子全报废了，所以，我将谨记导师教诲，培养箱要定期用0.1%的新洁尔灭或者84清洗，交替使用，防止微生物耐药。
预防水盘污染也很重要，水盘中加入饱和的磷酸氢二钠可以有效预防细菌真菌，但是需要定期加入去离子水防止析出。
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我知道，细胞房所有在用的枪头，必须要经过湿热灭菌，用报纸包裹好枪头，这样做是因为灭菌锅一般在细胞房外面，所以要保证内部枪头盒结晶。
烤干是为了防止内部有水分，当我开启枪头盒后，有水的地方更容易被霉菌的孢子所接触附着，也就更容易污染，所以，灭菌灭不好，是我的大错。我熟读并背诵下了这个灭菌法则，如若再不按规范操作，我直播吃手机。
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明知实验室条件有限，怀疑细胞污染了，我从来不抢救，实在是不懂事，为了表达我的歉意和悔改的决心，我总结出了细胞污染后的急救方法，顺便给学弟学妹参考，各位且背且珍惜。
首先要判断污染源，一旦发现细胞有污染的迹象或已污染，立即判断可能的污染源：有无操作不当？培养基、胰酶、PBS等颜色、澄清度是否正常？
其次要及时处理，若确定现有的培养基、胰酶、PBS可用，则继续使用；若无法确定则新配完全培养基、PBS、胰酶，原有的液体在确定是否污染后再做处理。
如果是霉菌污染，在以PBS润洗2~3遍后换液，无需加入高浓度双抗。培养48h后污染再次出现即可。
如果是真菌污染，在PBS润洗、换液后可加入两性霉素B（两性霉素B有细胞毒性，不推荐使用），也可加入300μg/mL氟康唑培养，污染控制后改用150μg/mL培养2~3代
如果怀疑是支原体污染，则可进行PCR检测或直接使用支原体清除试剂。也可购买环丙沙星注射液，于超净台内打开直接添加到培养基中，以20μg/mL浓度2代后改用10μg/mL浓度持续培养约2周。
不过，我还是坚持认为，如若条件允许，细胞污染后最好的处理方式是：丢弃！！！
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