对细菌染色的运用

在大学上实验课时，觉得很好玩，每次上完课还有鱼吃，所以总是盼着上实验课；对于那些操作，看似简单，觉得没什么难度，但现在用到了实际的生产一线，才发现就连一个最简单的染色都蕴藏着只有在一线操作才能感受到的知识。

通过细菌革兰阴性与革兰阳性的测定，可以将细菌分为两大类。通过这一检测就可以使用排除法，非此及彼地排除一类细菌，为准确用药提供一个最基本的参考。

水产养殖中，大多数病源菌都是革兰阴性菌，所以如果突然间遇到一个细菌性疾病，反复用了好多种抗生素都没有效果，那就要考虑是革兰阳性菌，比如常见的诺卡氏、链球菌都是革兰阳性菌。这些年好多人用抗革兰氏阴性菌的药来治疗革兰阳性菌疾病，当然药效就差了许多。

对于如何通过细胞结构去区分细菌阳性还是阴性，去年写过了，我把细胞结构不同引起阳性阴性的区分链接放在这里，有兴趣的可以打开。通过结构认识细菌（细胞壁篇）

今天来说另一个方面，为什么不同试剂能与不同的细菌结合，反应出不同的颜色的问题。只有把这些原理都搞清楚，才能在实践操作中减少误判。

染料含有氢离子和氢氧根离子，其浓度不同，酸碱性也是不一样的，具体分成碱性染料、酸性染料和中性染料。碱性染料的离子带正电荷，所以可以和带负电荷的物质结合。由于细菌蛋白质等电点较低，当它生长于中性、碱性和弱酸性溶液中时，时常带负电荷，所以通常用结晶紫、碱性复红、孔雀绿、美蓝等碱性染料来染色。反之，酸性染料的离子带负电荷，所以能与带正电荷的物质结合。当通过细菌对培养基的作用，pH下降时，细菌所带的正电荷增加，就可以通过酸性复红、刚果红、伊红等酸性染料着色。而中性的则可以用前面两种的结合物，如伊红美蓝、伊红天青等中性染料。

再来说说革兰染色的具体操作。操作程序是涂片--干燥--固定--结晶紫染色--水洗--碘液媒染--水洗--95%乙醇脱色--立即水洗--番红复染--水洗--晾干，在操作中，看似简单，实则稍有不慎，得出的结果就可能是错误的。

（1）比如乙醇脱色，如果脱色过度，革兰阳性菌可能被过度脱色而染成阴性菌；如果脱色时间过短，革兰阴性菌也会被染成革兰阳性菌。那这染色有没有一个标准呢？大体有一个，但也要根据涂片中细菌的厚薄与乙醇的用量，通过反复训练，掌握好时间，估计在20-25秒之间。

（2）再如取的菌，同样是一个菌，培养的时间长短不一样，检测出的结果也不一样，如果培养时间过长，细菌的菌龄太老，由于菌体死亡或自溶也可能会使革兰阳性菌得出阴性菌的结果。

（3）最后即使在染色中，也是有讲究的，比如载玻片上有水，会稀释染液的浓度，如果染液滴得太少，干了也会影响染色。