绿弧菌毒力更强？这里对虾大规模肝胰腺坏死病，发病率超50%，查清元凶是...

从肝胰腺坏死病的诊断实例谈南美白对虾细菌性病害的防控

文/图上海海洋大学水生动物病原库曹海鹏、刘杰、郑绪瑞

细菌性病害是南美白对虾养殖中最常发生的一类疾病，给养殖业造成了巨大的经济损失。其中尤以肝胰腺坏死病的危害最为严重。笔者对江苏省盐城地区养殖的南美白对虾肝胰腺坏死病的致病菌进行了检测，并进行了药敏分析，同时进一步提出了对南美白对虾细菌性病害防控的一点看法，以供养殖户参考。

一

基本情况

2022年2月底，江苏省盐城地区养殖的南美白对虾出现了大规模的肝胰腺坏死病，发病率高达50%以上，对当地南美白对虾养殖业造成了巨大损失。鉴于养殖户使用了各种药物对该病进行了治疗均未奏效，且对该病的致病菌不清楚，因而果断进行了问诊。

二

临床症状及诊断分析

肉眼检查：病虾食欲减退，空肠空胃。解剖检查：病虾肝胰腺出现不同程度坏死（图1），呈现典型的肝胰腺坏死病的症状。实验室检查：从各病虾的肝胰腺组织中通过弧菌选择性培养基分离出大量细菌，其在弧菌选择性培养基平板上的菌落特征为黄色、绿色，其中有的绿色菌落会随培养时间的延长变成黄色。通过对弧菌选择性培养基平板上的菌株进行分子鉴定与生理生化鉴定，证实分离菌株为嗜水气单胞菌、海藻希瓦菌、副溶血弧菌、沃氏葡萄球。同时对分离的菌株进行毒力因子检测，发现嗜水气单胞菌具有β溶血活性和蛋白酶活性；海藻希瓦菌无溶血活性，但有蛋白酶活性；副溶血弧菌既无溶血活性，也无蛋白酶活性（表1）。人工感染试验进一步表明，仅嗜水气单胞菌和海藻希瓦菌对南美白对虾具有致病力，故确定该病为嗜水气单胞菌和海藻希瓦菌感染所致。

图1，患病对虾的肝胰腺组织匀浆液

表1分离菌株的表型特征

菌株编号	弧菌选择性培养基平板上菌落特征	鉴定结果	溶血性	蛋白酶活性
1	先绿色后黄色	海藻希瓦菌	γ	有
2	绿色	副溶血弧菌	γ	无
3	黄色	沃氏葡萄球菌	γ	无
4	黄色	嗜水气单胞菌	β	无
5	先绿色后黄色	副溶血弧菌	γ	无
6	黄色	嗜水气单胞菌	β	有
7	黄色	嗜水气单胞菌	β	有
8	黄色	嗜水气单胞菌	β	有
9	黄色	嗜水气单胞菌	β	有
10	黄色	嗜水气单胞菌	β	有

注：γ表示不溶血。

图2，肝胰腺组织匀浆液中具有β溶血的菌数检测

三

药敏分析

分别分析分离的致病菌株对20种抗生素药物的敏感性，发现致病菌株对氟苯尼考、多西环素高度敏感。

四

小结与讨论

1、关于此次南美白对虾肝胰腺坏死病的发生，应该是嗜水气单胞菌和海藻希瓦菌入侵肝胰腺导致肝胰腺组织不同程度损伤造成的。因此，在养殖生产中对细菌性病害的防控应以预防为主，尤其是细菌性病害的致病菌往往具有多样性（致病菌不止一种），故建议养殖户使用既能杀菌又能增强免疫力的优质广谱杀菌型微生态制剂进行预防，而且病从口入，与定期水体消毒杀菌相比更应重视通过拌饲具有广谱抑（杀）菌性能的优质微生态制剂强化对肝胰腺的保护，以降低细菌性病害的发生率。

2、弧菌选择培养基平板上可能有其他的无致病毒素的菌生长，如沃氏葡萄球菌。因此，养殖生产上不能完全根据弧菌选择培养基平板对养殖水体和虾体中的检测结果（如菌落颜色、菌落数量），关键是要分析能够产生毒素的菌数，如本实例中检测出肝胰腺组匀浆液中具有β溶血活性的潜在致病菌的含量达到了104 CFU/mL以上（图2）。

3、本实例中检出的嗜水气单胞菌在弧菌选择培养基平板上的菌落呈黄色，具有β溶血毒素和蛋白酶活性，而检出的副溶血弧菌，在弧菌选择培养基平板上的菌落有的是绿色，有的是先绿色后变黄色，但均无β溶血毒素和蛋白酶活性，对南美白对虾的危害远没有嗜水气单胞菌大。因此，业界所说的绿弧菌比黄弧菌毒力强的观点极为片面，不是很科学，不能被诱导，也不能过度夸大副溶血弧菌的危害。

4、本实例中致病性嗜水气单胞菌和海藻希瓦菌的毒力比副溶血弧菌强，在养殖生产上往往被忽视，应予以重视。与此同时，本实例中虽然证实致病菌株对氟苯尼考、多西环素高度敏感，但致病菌耐药性进化速度快，而且抗生素能够奏效还受药物含量、对虾摄药量等多种因素的影响，在生产实践使用后不一定达到理想效果。

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