越来越多的证据表明细胞外囊泡(Evs)具有一些特异性的膜蛋白，例如CD63，CD81，PD-L1等，研究这些膜蛋白的表达水平差异有助于寻找与疾病相关的生物标志物，用于疾病的诊断和治疗。然而，EVs蛋白的表达水平受EV数量和每个EV携带蛋白量的影响。事实上，EV的释放具有很大的个体差异，即使是同一个人也会受到生理状况变化的影响。因此，单纯地检测样本之间的蛋白表达水平很难判断蛋白表达水平的升高是由于EVs数量增加还是由每个EV所携带的蛋白质含量更高造成的。虽然NTA等定量分析技术在一定程度上可以帮助对Evs进行数量和浓度定量测量，但是这些设备受到价格空间等条件限制，还不能在实验室中广泛使用。而先在同一个方法内实现对EVs数量（或浓度）的归一化，再进一步对蛋白标志物的表达水平进行比较和评估可以使定量分析的结果更加准确可靠，有助于更准确地找到EVs肿瘤标志物。
近日，浙江大学姚波副教授的研究团队提出了一种基于亲脂性染料标记磷脂双分子层来评估EVs数量（或浓度）的策略，随后将其标准化为研究不同样本跨膜蛋白(CD63)在EVs上的表达的内标。该团队发现，在归一化EVs数量前后，血浆样品中EVs-CD63的表达有很大的改变。相关内容以“Rapid enrichment andsensitive detection of extracellular vesicles through measuring thephospholipids and transmembrane protein in a microfluidic chip”为题发表在Biosensors and Bioelectronics杂志上(2022(199), 113870)。文章的第一作者为浙江大学化学系硕士研究生任永安。
该研究首先设计了一种微流控电泳平台，基于EVs在直流电场中的电迁移行为，EVs会聚集在充满高浓度琼脂糖凝胶的微通道交叉连接处，短时间内即可实现EVs的有效富集和游离染料分子的去除。该方法采用了两种荧光标记EVs的策略，亲脂性染料用来代表EVs的数量（脂质分析），FAM标记的适配体用来代表EV的总CD63表达水平（CD63蛋白表达）。
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