应北京恩泽康泰生物科技有限公司的邀请，国际外泌体研究领域顶级专家，澳大利亚拉筹伯大学特聘教授，Richard Simpson院士及其团队近期到访北京，进行为期一周的交流访问，并进行了多场高水平的学术报告。外泌体之家为此进行了专访。
以下为专访内容，Richard Simpson院士就外泌体之家成员提出的问题一一作了解答:
Q&A about exosomesfor RichardJ. Simpson
外泌体之家hzangs提问:
Q1: Now, there are several kinds of exosomes isolation methods, just likePEG-based precipitation,SEC, immunoprecipitation, microfluidic-chip and so on.Which would you prefer in the futureclinical application? 目前外泌体的分离方法有很多种，例如基于 PEG 的沉淀，凝胶排阻层析，免疫沉淀，微流控芯片等，您认为在未来的临床应用中哪一种方法可能会更有前景？
Richard J. Simpson：这取决于具体的应用场景。PEG会分离杂质比如蛋白等。凝胶排阻层析能够获得比较纯的外泌体，可以分开杂质，但是处理样本的体积会受限制。免疫沉淀需要专门的抗体，成本较高，捕获的是目标外泌体，但不能反映全局。微流控芯片能把外泌体分离和检测集成在一起，但是需要填充管道，导致处理样本的体积会损失。我们认为随着研究的深入，会有越来越多的好方法出现，不管怎样，快速，低成本，高纯度的捕获外泌体的方法才是应用临床最好的方法。
Q2: Compare to cfDNA and CTCs, would share your insights about the advantagesof exosomesin liquid biopsy? 与游离的 DNA 和循环肿瘤细胞相比，请您分享您的见解和认识：外泌体在液体活检领域的应用优势有哪些？
Richard J. Simpson：他们在液体活检领域都是很重要的方向，相互补充。外泌体在肿瘤早期就有比较多的分泌到体液中，利于早期检测。由于有脂质膜包裹，能够比较稳定的检测到RNA层面的信息。同时表面具有独特的蛋白，通过人工改造，可以作为药物载体转运到对应的部位用于临床治疗。
上海健康医学院Yang提问：
Q1: We have seen some researches about exosomes proteomics, including in vitrocultured cells orblood, but their results of mass spectrometry show the numbersof proteins ranging from onehundred to several thousand, why is there such alarge kinds of differences? 我们看到很多文章做外泌体的蛋白质组，包括细胞和血清的外泌体，但是他们质谱做下来的蛋白质数量从一两百到几千不等，为什么会有这么大的数量差异？
Richard J. Simpson：首先是因为不同实验室外泌体分离的方法以及来源不一样，会导致后期蛋白检测数量的差异。其次不同实验室质谱检测以及分析的条件不一致，也会导致检测到的蛋白数量有差异。
Q2: What do you think of the future of blood exosomes in the clinical detectionof diseases (suchas cancer, etc.)? 您认为，血液外泌体检测以后在临床上的疾病检测（比如癌症等）的前景如何？
Richard J. Simpson：它作为细胞间信号转导的载体，具有丰富的可检测靶标（蛋白，DNA，RNA，脂质等）且非常稳定，所以血液外泌体将在疾病临床检测中扮演越来越重要的角色，前景非常巨大。
外泌体之家Johnny提问：
Q1: About the exosome applications development, ether diagnostic ortherapeutic, which component do you think have the biggest prospects? Proteinor RNAs in it, or something else?关于外泌体的应用，无论是诊断还是治疗，您认为哪类成分最具有应用前景？蛋白质？RNAs？或者其他成分？
Richard J. Simpson：他们都有其独特的意义，都很重要。但从检测技术层面来说，RNA可以进行扩增，而蛋白不能，一些含量很低的蛋白现有手段可能没法检测到，所以目前来看，我们认为基于外泌体RNA检测可能会走在前面。
Q2: Currently, we cannot obtain 100% pure exosomes whatever method you use.Some of the scientist in the US are not optimistic about this area. How do youlook at this issue? Will it impactour research and application on exosomes? 目前外泌体分离难以达到 100%的纯度，我听说一些美国的科学家们因此对外泌体的应用并不看好。您怎么看待这个问题？这会对外泌体的研究和应用开发产生不利影响吗？
Richard J. Simpson：分离100%纯度外泌体是所有科学家的目标，但是从应用层面，并不需要100%纯度的外泌体才能应用到临床上去，如果我们掌握了稳定的技术手段并且结果被临床所验证认可，那就非常值得去开发和研究。
浙江大学医学院附属第二医院Shao提问：
Q1: For exosomal protein detection or research, is it necessary to distinguishbetween membraneprotein and internal protein? 检测外泌体蛋白，是否应该区分膜蛋白与腔内蛋白?
Richard J. Simpson：是的。他们的成分和功能不一样，在研究中有必要进行区分，因为膜外的蛋白在细胞间通讯中起着重要作用，不同的表面蛋白可能指示着外泌体去向不同的组织部位，但前提条件是要获得高纯度的外泌体材料来进行研究。
Q2: Is the composition of exosomal membrane protein same with the cellmembrane? 外泌体膜蛋白的组成是与细胞膜相同的吗?
Richard J. Simpson：我们有做过这方面工作。发现他们的结构是一样的，都是磷脂双分子层结构，但是他们蛋白成分的含量不一样。
Q3: What is the mechanisms of exosomal protein sorting in the process ofexosome biogenesis?外泌体内蛋白的形成机制?
Richard J. Simpson：外泌体蛋白形成的机制不是一个广泛适应的机制，现有报道的机制有泛素化，磷酸化，SUMO蛋白修饰等，这是一个很复杂的过程，还需要更多的研究去了解。
Q4: In addition to be used as biomarkers, do proteins exosomes carrying play arole in the physiological and pathological process?外泌体携带蛋白信息除了可以被当做生物标志，其本身在体内可能发挥什么作用?
Richard J. Simpson：答案是肯定的，他们可以促进血管生成，调控成纤维细胞生成，促进肿瘤细胞转移等，可能还有很多其他作用并没有被我们所认识到，需要更多的研究和探索。
结语：通过Richard Simpson院士的这次专访，我们感兴趣的问题得到了答案，相信各位外泌体研究同仁对外泌体的一些方面也有了更深的认识，也希望大家有所收获，最后我们谢谢Richard Simpson院士的热情解答！
Richard Simpson院士简介：
澳大利亚技术科学与工程院院士，拉筹伯大学（La Trobe University）特聘教授、分子科学研究院主任。曾先后担任澳大利亚圣文森医学研究所（St.Vincent’s Institute of Medical Research）任高级研究员及路德维希癌症研究所（1983-2011）、墨尔本大学教授。他在Nature、Cell、Nature Biotechnology、Nature Methods等学术杂志上发表论文472篇；在JBC、Proteomics、Journal of Cancer等19个国际学术杂志担任高级编委和编委，同时也是NatureBiotechnology、Molecular and Cellular Biology等杂志的审稿人。还曾担任HUPO秘书长、AOHUPO执行委员会主席、澳大利亚蛋白质组学学会（APS）主席等职务。
在解析蛋白质化学研究方面，开创了许多经典的微量测序策略和为蛋白质组学而改良的微分离工具；蛋白质组学研究方面，开发了一套结直肠癌蛋白质组学分析（特别是新标志物的发现，以及外泌体/分泌蛋白质组研究）的重要方法；在外泌体及囊泡研究⽅方向发表论⽂文达60余篇，建立第一个外泌体标志物数据库ExoCarta以及 Vesiclepedia、EVpedia 等外泌体及囊泡相关的资源；被汤森路透评为2015年和2016年全球“高被引用科学家（Top 1%）”及2015“全球最有影响力的科学头脑”。
关于北京恩泽康泰
恩泽康泰致力于外泌体技术及诊断产品研发，团队在此方面有长达10余年的积累，建立了包括超速离心、梯度密度离心、免疫捕获（多种抗体）及PEG沉淀等多种分离富集方式。团队在研的外泌体分离方法能够有效克服耗时、操作复杂及高成本等痛点，实现稳定、快速、操作简单及低成本的外泌体分离，将为外泌体的临床应用奠定良好的基础。
公司有一支来自UCLA、LTU和国内顶级学府的技术研发团队和管理团队。专注于外泌体诊断产品研发，以“管控癌症”为使命，致力于提高癌症患者的生存率和生活质量，希望将创新性的技术转化为对患者有价值的产品。
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