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人血小板反应蛋白/凝血酶敏感蛋白1(TSP-1)ELISA检测试剂盒操作步骤

常见ELISA试剂盒:动物细胞因子、补体、白介素、选择素、集落刺激因子、肿瘤坏死因子、干扰素、转化生长因子、趋化因子、细胞因子受体、粘附分子、生长因子、凋亡因子、植物细胞因子、骨代谢、细胞凋亡、激素内分泌、活性多肽、肝纤维化、自身抗体、血栓与止血、肿瘤、自身抗体等科研ELISA试剂盒。

操作流程:

1)待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl

2)酶标板置4℃,包被过夜。

3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。

4)阴性对照孔每孔加入PBS 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl

5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min

6)洗板,同(4)。

7)每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl

8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min

9)洗板,同(4)。

10)每孔加TMB显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min

11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。

12)分别测450nm 吸光值W1630nm吸光值W2,最终测得的OD值为两者之差(W1-W2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。

13)数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的 OD值后,计算S/N值。S/N2.1为阳性判定标准。

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zzj 2021.3.24

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