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摘要
药品质量研究涉及各种类别的检测，如清洁验证、元素杂质检测、包材密封性验证、LC-MS基因毒警示结构杂质检测、粒度检测等，分析人员最关心的事就是我开发的方法是否能够满足审评要求，各国药典及政策法规是怎么规定的，本文进行了汇总，不足和缺陷之处，请同行批评指正。1清洁验证
通常清洁验证有生产公司进行，参照2010版GMP指南相关规定及APIC清洁验证指南（原料药2014年），可接受标准如下表所示：
清洁验证可接受标准
验证项
可接受标准
专属性
空白溶剂，空白棉签溶液所得图谱在主峰保留时间处无干扰
线性
相关系数r≥0.990
重复性
RSD≤10%
中间精密度
RSD≤10%
定量限和检测限
报告定量限和检测限的信噪比
报告定量限和检测限溶液的浓度:
定量限样品梅、被连续进样6次，峰面积的RSD值不大于10.0%。
方法回收率
80%-120%
棉签回收率
各棉签回收率店大于75%，棉签回收率的RSD应不大于10.0%
不锈钢板回收率:
计算各回收率溶液的结果，回收率应大于75%;
· 两个实验员分别擦拭3个平行回收率溶液测定值的RSD应不超过10.0%;
· 6个平行回收率溶液测定值的RSD应不超过10.0%;
· 两个实路员3个回收率的平均值之差应不大于5.0%。
稳定性
各时间点峰面积的RSD应不大于3%。
2元素杂质检测-ICP-MS
根据ICHQ3D相关规定，注射剂、口服制剂及吸入制剂均需进行元素杂质风险评估，根据控制策略，可分为限度法和定量法，参照USP233相关规定，可接受标准如下表所示：
元素杂质可接受标准
类别
样本量
验证内容
可接受标准
限度检测法
必须通过加标实验考察方法的适用性，向待测样品中加入已知浓度（近似为限度浓度），待测样品加标必须在任何样品制备操作之前。
仪器法要求三次平行测定。
灵敏度（检测能力）：
标准溶液：由对照品配制，使目标元素浓度为限度浓度。
加标样品溶液1：制备待测样品溶液，加入适量标准物质，使目标元素浓度为限度浓度，按样品制备项下溶解或消化制备。
加标样品溶液2：制备待测样品溶液，加入适量标准物质，使目标元素浓度为限度浓度的80%，按样品制备项下溶解或消解制备。
样品溶液：参照样品溶液制备项。
非仪器方法：
加标样品溶液1信号强度大于或等于标准溶液。加标样品溶液2信号强度必须小于加标样品溶液1.
注：两加标溶液信号强度均不小于未加标样品溶液。
仪器方法：
加标样品溶液1三次重复测量的平均值，应在该标准溶液重复测定平均值±15%范围内。加标样品溶液2重复测定平均值必须小于标准溶液。
注：加标溶液测定值应用未加标样品溶液矫正。
6份样品
方法精密度（重复性）：
取待测物独立6个样，加入适量参照物质，使各目标元素浓度为限度浓度。
NMT20%
/
专属性：
共存的其他成分（包括其他目标元素、基质成分）。
不得干扰检测
定量法
（标准曲线法）
必须通过实验（用合适的系统适用性方法和参考物质）说明该方法对于目标元素定量与药典法等价。
三个水平，每个浓度三份样品
准确度
范围：50%-150%
标准溶液：用合适的参照物质，配制不同浓度含目标元素的溶液。
测试样品：在任何样品前处理之前，向待测物中添加适量的参照物质。
每个水平回收率均值70%-150%
6份
精密度（重复性）
相同批号的待测物，取6个独立的样，加入适量参考物质，使目标元素达到指定浓度
NMT20%（N=6）
6份
耐用性
针对三个独立因素进行重复性分析，考察下面因素或者组合
不同天或不同仪器或不同分析人员
NMT25%（N=12）
专属性
共存的其他成分（包括其他目标元素、基质成分）。
不得干扰检测
至少6份样品
定量限
符合线性、精密度、准确度的最低浓度，
基于响应值标准偏差或标准曲线斜率法。
至少5个浓度点，每个点测定3次
线性
50%-150%
线性相关系数r应不小于 0.990
3元素杂质检测-原子吸收
原子吸收光谱仪又称原子吸收分光光度计，根据物质基态原子蒸汽对特征辐射吸收的作用来进行金属元素分析。它能够灵敏可靠地测定微量或痕量元素。仪器费用及检测成本比ICP-MS/OES低，参照USP852相关规定，可接受标准如下表所示：
原子吸收方法验证
验证项
内容
可接受标准
准确度
对于I类分析或II类试验，可通过使用添加已知元素浓度的适当基质进行回收率研究来确定准确度。也可接受的做法是将验证中使用AA程序获得的分析结果与已建立的分析程序的结果进行比较。在标准加入法中，准确度评估是基于最终截距浓度，而不是根据单个标准加入量计算的回收率。
原料药分析和制剂分析的平均回收率为95.0%-105.0%，杂质分析的平均回收率为70.0%-150.0%。这些标准适用于整个预期范围。
精密度
重复性
测量六个100%试验浓度的独立样品溶液的浓度来评估。或者，可以使用三个不同浓度的独立样品溶液的三个复制品。三种浓度应足够接近，以便在浓度范围内重复性恒定。如果这样做，将三种浓度下的重复性集中起来，以便与验收标准进行比较。如果用标准加入法验证程序，则精度标准适用于最终实验结果，而不是单个标准加入水平的精度。
中间精密度
不同日期、不同仪器、不同人员，通过改变至少两种上述条件（总共12次测试）的任何组合中进行重复性试验；
重复性（N=6）：原料药含量测定RSD不超过5.0%，制剂含量测定RSD不超过5.0%，杂质分析RSD不超过20%。
中间精密度（N=12）：原料药含量测定RSD不大于8.0%，药品含量测定RSD不超过8.0%，杂质分析RSD不超过25.0%
专属性
可能存在的成分（包括任何基质成分）。
符合准确度要求
定量限
可以通过计算空白溶液的六次重复测量的NLT标准偏差，除以标准曲线的斜率，再乘以10，来估算定量限（QL）。
如果使用标准加入法验证程序，则使用适用于试验材料溶液的标准斜率。
必须对用于估计QL浓度加标的代表性样品基质制备的试验溶液进行测量，以确认准确度。如果使用标准添加方法验证程序，验证标准适用于最终实验结果，而不是单个标准添加水平的峰值恢复。
应能在相当于标准物50%的水平上准确地测定分析物。
线性
浓度和吸光度之间的响应曲线由五种标准溶液制成，浓度包括试验溶液的预期浓度。然后使用适当的统计方法（如最小二乘回归）对标准曲线进行评估。
对于不产生分析物浓度与AA响应之间线性关系的实验，必须采用适当的统计方法来描述分析响应。
相关系数（R），I类检验NLT 0.995，II类定量检验NLT 0.99
范围
范围是指样品中包括分析物的高浓度和低浓度（量）之间的间隔，以证明分析程序具有适当的精密度、准确度和线性度。通过满足线性度、精度和精度要求来证明量程。
对于I类试验，以100.0%为中心的验收标准的验证范围为80.0%–120.0%。对于非输入验收标准，验证范围为低于下限10.0%，高于上限10.0%。对于含量均匀性，验证范围为70.0%–130.0%。对于II类试验，验证范围涵盖验收标准的
50.0%-120.0%。
耐用性
包括但不限于样品制备步骤和加热程序，包括雾化保持时间或雾化温度。当改变燃料和氧化剂气体流量和燃烧器硬件时要小心，因为这可能会造成回火情况。
4包材密封性方法验证
根据《化学药品注射剂包装系统密封性研究技术指南》相关要求，注射剂应采用确定性方法如真空衰减法等对包装材料的密封性进行评价，参照USP1207相关规定，可接受标准如下表所示
真空衰减法方法验证
验证项
可接受标准
系统适用性
取Master测试十次，结果均应为Pass，打开流量计后，结果应为Fail，在关闭流量计后，结果应为Pass。
检测限
找出0%通过和100%失败结果，检测结果均为Fail
线性与范围
线性方程（报告结果）
相关系数平方R2>0.99
在检测限以上该方法可以检测到泄漏。
准确度
能够使不漏的样品和微型流量计模拟的泄漏结果得到区分。
精密度
重复性：
第一人（n=10）
Cycle 1：绝压最大值与最小值读数≤10mbar；
差压最大值与最小值读数≤15Pa；
Cycle 2：绝压最大值与最小值读数≤2mbar；
差压最大值与最小值读数≤15Pa；
中间精密度
第二人（n=10）和两人（n=20）结果均满足：
Cycle 1：绝压最大值与最小值读数≤10mbar；
差压最大值与最小值读数≤15Pa；
Cycle 2：绝压最大值与最小值读数≤2mbar；
差压最大值与最小值读数≤15Pa；
专属性
能够使不漏的样品和5μm阳性样品/开启流量计（流量调至0.21cc/min）测试样品的泄露结果得到区分。
耐用性
Cycle 2的测试时间调整为19.50sec
样品结果应不泄露，用微型流量计模拟检测限漏孔测试结果应检测到泄漏。
Cycle 2的测试时间调整为20.50sec
5基因毒警示结构检测方法验证
基因毒警示结构杂质限度较低，通常采用液相色谱质谱进行检测，可接受标准该如何制定，个人认为应评估是否有基质效应，若无，参照《中国药典》9101相关规定；若有，参照《中国药典》9012生物样品定量分析方法验证指导原则及物料的属性制定适当的限度。
基因毒警示结构杂质检测可接受标准
验证项目
可接受标准
（无基质效应，9101）
可接受标准
（含基质效应，9012）
备注
离子选择合理性
1.母离子选择特征碎片离子
2.子离子需要给出裂解方式，并选择最优离子。
1.母离子选择特征碎片离子
2.子离子需要给出裂解方式，并选择最优离子。
需要提供特征谱图
选择性
不得有干扰
当干扰组分的响应低于分析物定量下限响应的20%，并低于内标响应的5%时，通常可以接受
残留
不涉及
高浓度样品之后在空白样品中残留应不超过定量下限的20%，并且不超过内标5%，如有必要在高浓度样品后注射空白样品，然后分析下一个试样样品。
定量限
信噪比约为10；
峰面积RSD≤15.0%。
即定量下限：
具有可接受的线性关系、准确度和精密度
检测限
信噪比≥3
不涉及
标准曲线
相关系数≥0.990；
报告残差平方和。
校正标样回算的浓度一般应该在标示量的±15%以内，定量下限处应该在±20%以内
定量限至限度浓度1.5倍即可，LC-MS有时线性范围较窄
准确度
参照9101项下相关规定，定量限同一数量级，可适当放宽
批内：应在质控样品标示量±15%范围内，对于定量下限，应在标示量的±20%范围内
批间：同批内相关要求
精密度
参照9101项下相关规定，定量限同一数量级，可适当放宽，但不得过15%
批内：变异系数不得过15%，定量下限的变异系数不得超过20%
稀释可靠性
不涉及
准确度和精密度在±15%之内
基质效应
不涉及
从6批基质计算的内标归一化的基质因子的变异系数不得大于15%（低浓度和高浓度）
稳定性
与0h比，变化值≤15%
与标示量比，不同浓度浓度均值与标示量的偏差应在±15%范围内
6粒度检测分析方法验证
检验项目
验证内容
接受标准
粒度分布（光散射法）
重复性n=6
d(0.1) 和 d(0.9) ＞10um，NMT 15%
d(0.5) ＞10um，NMT 10%
d(0.1) 和 d(0.9) ≤10um ，NMT 30%
d(0.5) ≤10um，NMT 20%
中间精密度n =12
参照重复性
重现性n =12
七、参考文献
[1] 2010版清洁验证实施指南
[2] USP233/USP852/USP1207
[3] 2020版《中国药典》
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