杂质定量测定的验证要求

继续方法验证有关的话题，这一系列的逻辑顺序应该是非常强的，前面三期分别聊了分析方法验证-概述，鉴别测试的专属性及耐用性，杂质限度测定的验证，今天继续的话题是杂质定量测定的验证要求。

相比较上期分享的限度测定几个关键的参数指标专属性、耐用性和检测限而言，杂质的定量测定又多了精密度、准确度、定量限、线性、范围的要求，可以说是各类方法验证的类型中最为复杂的一种，这在各国或者机构的药典中要求基本上都是类似的，详细可参见下面的这张附件表格（来自GMP验证指南）。

准确度是指被验证的分析方法测量的结果与真实值或参考值之间接近的程度，一般用回收率表示。

对于杂质的定量测定而言，可采用以下三种方法：

1）向原料药或者制剂中加入已知量杂质进行测定；通常试验会设计三个不同的浓度80%、100%、120%，每个浓度制备3份供试品溶液，进行测定，计算回收率以及相对标准偏差；

2）如果不能得到杂质或降低产物，可用被验证的方法测定的结果与其他方法进行比对；

3）在不能测得杂质或降解产物的响应因子或不能测得对原料药的相对响应因子的情况下，可用原料药的响应因子，应明确单个杂质和杂质总量相对于主成份的重量比或峰面积比。

精密度是指在规定的测试条件下，同一均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的精密程度。

对于精密度的测试，有的时候容易会有一个误区，认为对一个制备样品重复进样N次就可以考察分析方法的精密度，这其实只是确认了设备的精密度而已，从方法验证的角度来看，方法精密度的验证应该包括整个样品的制备过程。

精密度的方法验证又可以进一步细分为：

重复性：相同条件，同一人不同操作的结果精密度

中间精密度：同一实验室，不同时间，不同人，用不同设备的结果之间的精密度

重现性：不同实验室，不同分析人员测定结果之间的精密度。

精密度测试对于杂质定量以及含量测定两大类定量方法而言，差别并不太大。

精密度与准确度是定量性质的方法验证的最重要的两个指标，两者的关系可以参见下面的图片：

定量限则与之前提到的检测限多少有些类似，只不过杂质定量限所采用的信噪比一般为10：1时相应的浓度为结果来确定注入仪器的量确定定量限。

最后两个指标，线性与范围其实在某种程度上有一定的类似，我们将放在下一期关于含量的方法验证中继续分享。