引证本文：朱悦,钱晓寒,季国忠,杨丽华.血清胆汁酸谱在非酒精性脂肪性肝病患者中的表达及意义[J].肝脏,2021,26(11):1279-1282+1297.
作者单位：210011 江苏 南京市第二医院(朱悦)；南京医科大学第二附属医院(钱晓寒，季国忠，杨丽华)
通信作者：杨丽华，Email：hualiyang6501@126.com；季国忠，Email：jgz@njmu.edu.cn
【摘要】 目的 探索胆汁酸谱系在NAFLD中的变化及应用价值。方法 选取2019年7月至2020年7月至南京医科大学第二附属医院就诊的60名NAFLD患者及54名健康体检者为研究对象，收集受试者的临床资料及血液标本，采用高效液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)检测受试者血清中15种胆汁酸的水平并进行相关统计分析。结果 与健康对照组相比，NAFLD组胆酸(CA)、鹅脱氧胆酸(CDCA)、甘氨胆酸(GCA)含量明显升高、石胆酸(LCA)含量明显降低(P<0.05)，其余11种胆汁酸包括脱氧胆酸(dca)、熊脱氧胆酸(udca)、甘氨石胆酸(glca)、甘氨脱氧胆酸(gdca)、甘氨鹅脱氧胆酸(gcdca)、甘氨熊脱氧胆酸(gudca)、牛磺胆酸(tca)、牛磺石胆酸(tlca)、牛磺脱氧胆酸(tdca)、牛磺鹅脱氧胆酸(tcdca)、牛磺熊脱氧胆酸(tudca)含量均无统计学差异(p>0.05)；在NAFLD组中，血清DCA、GCA、GDCA、GCDCA、TCA、TCDCA水平与ALT、AST均呈正相关；BMI、LCA水平与NAFLD发病风险相关[OR(95%CI)分别为1.615(1.224，2.131)、0.946(0.906，0.987)，P值均<0.05]；胆汁酸谱中诊断评估能力较高的有CA(AUC=0.640)、CDCA(AUC=0.617)、GCA(AUC=0.634)。结论 非酒精性脂肪性肝病患者血清胆汁酸谱发生明显改变，做好胆汁酸谱的分析对NAFLD患者病情的诊断评估具有积极意义。
【关键词】 非酒精性脂肪性肝病；胆汁酸谱；无创诊断
非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)，是指排除大量饮酒和其他明确肝损因素外所导致的肝脏脂肪过度蓄积为特征的临床病理综合征[1]。近年来，随着人们生活方式、饮食结构的改变，NAFLD患患者数逐年递增，现全球患病率在25%左右，亚太地区则可高达29%[2-3]。NAFLD发病机制复杂，尚无定论，但目前已有报道指出胆汁酸的代谢紊乱可能参与NAFLD发生发展[4-6]。本研究通过检测NAFLD患者血清胆汁酸谱的变化，初步探讨胆汁酸谱对NAFLD患者病情诊断评估的意义。
资料与方法
一、研究对象
选取2019年7月至2020年7月至南京医科大学第二附属医院就诊的非酒精性脂肪性肝病患者60例，为NAFLD组。参照《非酒精性脂肪性肝病防治指南(2018年更新版)》[7]，制定纳入和排除标准。纳入标准：①肝脏彩超、CT、MRI等影像学表现诊断为脂肪肝；②病理活组织检查发现显著肝脂肪变。排除标准：①因过度饮酒、肝毒性药物使用、病毒感染、自身免疫性肝炎、肝豆状核变性、全胃肠外营养等特殊情况引起的脂肪肝；②严重心肺肾功能不全者；③合并恶性肿瘤患者。同期选取至本院体检的健康人群54例，为对照组。
二、研究方法
收集所有受试者的相关临床资料，包括性别、年龄、身高、体质量，计算BMI。所有受试者均在禁食8 h后，于隔日清晨抽取2管空腹血标本，1管送至检验科予常规生化检查，收集相关指标包括ALT、AST、GGT、尿酸、TG、TC、LDL、HDL。另1管置于室温下15 min后，离心、收集血清样本1 mL，置于-20 ℃冰箱保存以备后续胆汁酸谱的检测。采用高效液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)检测受试者血清中15种胆汁酸含量，包括胆酸(CA)、脱氧胆酸(DCA)、鹅脱氧胆酸(CDCA)、熊脱氧胆酸(UDCA)、石胆酸(LCA)、甘氨胆酸(GCA)、甘氨石胆酸(GLCA)、甘氨脱氧胆酸(GDCA)、甘氨鹅脱氧胆酸(GCDCA)、甘氨熊脱氧胆酸(GUDCA)、牛磺胆酸(TCA)、牛磺石胆酸(TLCA)、牛磺脱氧胆酸(TDCA)、牛磺鹅脱氧胆酸(TCDCA)、牛磺熊脱氧胆酸(TUDCA)。
三、统计学分析
采用SPSS 20.0统计软件进行相关数据分析。计数资料两组间比较采用卡方检验；符合正态分布的计量资料以±s表示，2组间比较采用独立样本t检验；不符合正态分布的计量资料以M(P25, P75)表示，两组间比较采用独立样本非参数Mann-Whitney U检验；相关性分析采用Spearman秩相关分析法；胆汁酸谱及相关生化指标与NAFLD发病风险之间的关系采用二元logistic回归分析；对胆汁酸谱进行受试者操作特征曲线(ROC)分析，选取有价值的诊断指标，并计算其临界值、灵敏度及特异度。
结 果
一、一般资料
NAFLD组60例患者中，平均年龄(44.57±13.76)岁，其中男42例，女18例；健康对照组54例中，平均年龄(49.22±13.04)岁，其中男34例，女20例，两组年龄、性别差异无统计学意义(P>0.05)。NAFLD组患者BMI、ALT、AST、γ-GT、尿酸、TG、TC、LDL水平均明显高于健康对照组(P<0.05)，HDL水平显著低于健康对照组(P=0.017)(表1)。
表1 两组受试者一般资料比较
项目对照组脂肪肝组P值年龄49.22±13.0444.57±13.760.067BMI23.45 (21.68, 25.20)27.50(25.10, 29.40)0.000ALT16.00 (12.75, 23.30)31.45 (17.50, 69.05)0.000AST18.55(15.60, 22.80)21.25 (15.40, 35.52)0.003γ-GT24.00 (17.00, 44.50)30.00 (19.75, 63.00)0.037尿酸275.00(254.00, 367.00)319.50(266.75, 380.00)0.015TG1.46(0.97, 1.93)1.69 (1.22, 2.40)0.013TC4.43(3.61, 5.17)4.84(4.27, 5.56)0.014LDL2.639±1.2063.110±0.9090.010HDL1.186±0.3421.047±0.2550.017
二、NAFLD组与对照组间胆汁酸谱系的比较
NAFLD组与健康对照组胆汁酸谱系检测中DCA、UDCA、GLCA、GDCA、GCDCA、GUDCA、TCA、TLCA、TDCA、TCDCA、TUDCA差异无统计学意义(P>0.05)；CA、CDCA、LCA、GCA差异有统计学意义(P<0.05)，其中CA、CDCA初级游离胆汁酸、GCA初级结合胆汁酸含量显著高于对照组，LCA次级胆汁酸在NAFLD组中的含量较对照组有所降低(表2)。
表2 两组受试者胆汁酸谱系比较
Spearman秩相关分析结果显示，NAFLD组中血清DCA、GCA、GDCA、GCDCA、TCA、TCDCA含量与ALT、AST水平均呈正相关(P值均<0.05)(表3)，此外TDCA与AST、GCA与γ-GT、TCA与γ-GT、TCA与LDL也呈正相关，P值和相关系数分别为0.030、0.280，0.014、0.317，0.008、0.341，0.047、0.257，其余各胆汁酸谱系与各生化指标之间均无明显相关性(P>0.05)。
表3 NAFLD组胆汁酸谱系与ALT、AST的相关性
指标DCAr值P值GCAr值P值GDCAr值P值GCDCAr值P值TCAr值P值TDCAr值P值TCDCAr值P值ALT0.2910.0240.4960.0000.3070.0170.3890.0020.4590.0000.2080.1110.3310.010AST0.2740.0340.5380.0000.3150.0140.4060.0010.5340.0000.2800.0300.3720.000
以是否患有非酒精性脂肪性肝病为因变量，两组间有差异的胆汁酸及生化指标为自变量，进行二元logistic回归分析。BMI及LCA与NAFLD患病风险明显相关(P<0.05),根据表4的OR值结果，BMI为NAFLD患病的危险因素，LCA为NAFLD患病的保护因素。
表4 两组间有差异指标与NAFLD的关系
指标B值SEWald χ2OR95%CIP值BMI0.4790.14111.4801.6151.224～2.1310.001ALT0.0430.0272.5171.0440.990～1.1010.113AST-0.0200.0410.2460.9800.905～1.0620.620GGT-0.0060.0051.5310.9940.984～1.0040.216尿酸-0.0010.0040.0270.9990.992～1.0070.869TG0.0910.3100.0861.0950.597～2.0100.769TC-0.1181.0000.0140.8890.125～6.3100.906LDL0.8431.0880.5992.3220.275～19.6070.439HDL-1.8101.3711.7420.1640.011～2.4050.187CA0.0030.0022.2771.0030.999～1.0060.131CDCA0.0000.0000.5131.0000.999～1.0000.474LCA-0.0560.0226.6700.9460.906～0.9870.010GCA0.0000.0010.2531.0000.998～1.0010.615
根据胆汁酸谱ROC曲线分析结果，有较高诊断评估能力的指标为CA、CDCA、GCA，其曲线下面积(AUC)、灵敏度及特异度分别为0.640、68.3%、57.4%；0.617、76.7%、44.4%；0.634、71.7%、61.1%(表5)。
表5 胆汁酸谱系诊断效能
胆汁酸谱AUC95%CI临界值灵敏度(%)特异度(%)CA0.6400.539～0.74284.7568.357.4CDCA0.6170.513～0.72030976.744.4GCA0.6340.530～0.73899.471.761.1
讨 论
目前，非酒精性脂肪性肝病已成为我国最常见的慢性肝病和体检发现肝功能异常的最主要原因[7]。近年来，有大量研究致力于NAFLD发病机制的探索，表明其与遗传因素、胰岛素抵抗、肝脏的炎症反应及氧化应激、肠道菌群紊乱、胆汁酸的代谢紊乱等均具有不同程度的相关性[8-12]。胆汁酸不仅在脂质的消化吸收中发挥重要生理作用，其本身还可以作为信号分子，通过作用于FXR、TGR5受体调节糖脂及能量代谢平衡，从而在NAFLD形成机制中发挥一定作用[13-14]。因此，临床上分析NAFLD患者各亚型胆汁酸含量变化对NAFLD的无创诊断评估及发现全新治疗靶点有一定意义。
本研究通过分析于本院就诊的NAFLD患者及健康体检者的胆汁酸谱系，发现NAFLD患者的初级胆汁酸含量显著增高，这与Aranha等[15]的一项临床研究结果存在相似性，同时笔者发现与对照组相比，NAFLD组患者次级胆汁酸LCA水平有所降低，并且logistic回归分析显示LCA是NAFLD的保护因素，这可能与LCA是FXR、TGR5的有效激动剂相关[4]。此外，笔者还对各胆汁酸含量变化及肝酶水平进行了相关性分析，结果表明ALT、AST水平随着相关结合胆汁酸含量的增高而有不同程度的增高，提示胆汁酸的代谢紊乱可能对NAFLD患者肝功能存在一定影响。为了进一步评估胆汁酸谱系对NAFLD的诊断价值，笔者采取了ROC曲线分析，发现CA、CDCA、GCA对NAFLD的诊断具有一定意义，未来可以期待其与其他一些无创诊断指标相结合以进一步提高诊断效能。本研究相关结果结合既往一些临床基础研究成果[16-18] 均表明，NAFLD的发生发展、病情严重程度与胆汁酸代谢紧密相关。当然需要指出的是，本研究存在一些不足，对NAFLD的诊断结合了影像学表现，未完全采用病理学检查金标准，对NAFLD患者未进行病理学分级，故在研究胆汁酸谱与NAFLD患者病情严重程度关系方面存在一定局限性。此外，本研究样本量小，可能会造成统计学偏倚。
综上所述，NAFLD患者血清胆汁酸谱发生明显变化，提示胆汁酸代谢紊乱在NAFLD的形成过程中具有重要作用，血清胆汁酸谱的检测为临床上无创诊断评估及治疗NAFLD提供了新方向。
参 考 文 献
[ 1 ] European Association for the Study of the Liver (EASL), European Association for the Study of Diabetes (EASD), European Association for the Study of Obesity (EASO). EASL-EASD-EASO Clinical Practice Guidelines for the management of non-alcoholic fatty liver disease. J Hepatol, 2016, 64: 1388-1402.
[ 2 ] Yu Y, Cai J, She Z, et al. Insights into the Epidemiology, Pathogenesis, and Therapeutics of Nonalcoholic Fatty Liver Diseases. Adv Sci (Weinh), 2019, 6: 1801585.
[ 3 ] Wong GL, Wong VW. How many deaths are caused by non-alcoholic fatty liver disease in the Asia-Pacific region? Lancet Gastroenterol Hepatol, 2020, 5: 103-105.
[ 4 ] Chow MD, Lee YH, Guo GL. The role of bile acids in nonalcoholic fatty liver disease and nonalcoholic steatohepatitis. Mol Aspects Med, 2017, 56: 34-44.
[ 5 ] Wang C, Zhu C, Shao L, et al. Role of Bile Acids in Dysbiosis and Treatment of Nonalcoholic Fatty Liver Disease. Mediators Inflamm, 2019, 2019: 7659509.
[ 6 ] Gottlieb A, Canbay A. Why Bile Acids Are So Important in Non-Alcoholic Fatty Liver Disease (NAFLD) Progression. Cells, 2019, 8: 1358.
[ 7 ] 中华医学会肝病学分会脂肪肝和酒精性肝病学组，中国医师协会脂肪性肝病专家委员会.非酒精性脂肪性肝病防治指南(2018更新版). 实用肝脏病杂志，2018，21: 177-186.
[ 8 ] Safari Z, Gérard P. The links between the gut microbiome and non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD). Cell Mol Life Sci, 2019, 76: 1541-1558.
[ 9 ] Jiao N, Baker SS, Chapa-Rodriguez A, et al. Suppressed hepatic bile acid signalling despite elevated production of primary and secondary bile acids in NAFLD. Gut, 2018, 67: 1881-1891.
[10] Rao A, Kosters A, Mells JE, et al. Inhibition of ileal bile acid uptake protects against nonalcoholic fatty liver disease in high-fat diet-fed mice. Sci Transl Med, 2016, 8: 357ra122.
[11] Ferro D, Baratta F, Pastori D, et al. New Insights into the Pathogenesis of Non-Alcoholic Fatty Liver Disease: Gut-Derived Lipopolysaccharides and Oxidative Stress. Nutrients, 2020, 12: 2762.
[12] Jonas W, Schürmann A. Genetic and epigenetic factors determining NAFLD risk. Mol Metab., 2020: 101111.
[13] Rotman Y, Sanyal AJ. Current and upcoming pharmacotherapy for non-alcoholic fatty liver disease. Gut, 2017, 66: 180-190.
[14] Perino A, Demagny H, Velazquez-Villegas LA, et al. Molecular Physiology of Bile Acid Signaling in Health, Disease and Aging. Physiol Rev, 2021, 101:683-731.
[15] Aranha MM, Cortez-Pinto H, Costa A. Bile acid levels are increased in the liver of patients with steatohepatitis. Eur J Gastroenterol Hepatol, 2008, 20: 519-525.
[16] Nimer N, Choucair I, Wang Z, et al. Bile acids profile, histopathological indices and genetic variants for non-alcoholic fatty liver disease progression. Metabolism, 2021, 116:154457.
[17] Jahnel J, Z?hrer E, Alisi A, et al. Serum Bile Acid Levels in Children With Nonalcoholic Fatty Liver Disease. J Pediatr Gastroenterol Nutr, 2015, 61: 85-90.
[18] Yamada S, Kawaguchi H, Yamada T, et al. Cholic Acid Enhances Visceral Adiposity, Atherosclerosis and Nonalcoholic Fatty Liver Disease in Microminipigs. J Atheroscler Thromb, 2017, 24: 1150-1166.
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