如果可以,怎么跑?是不是和DNA电泳是一样的?
RNA当然也可以跑电泳,和DNA电泳的条件是一样的,但是要用到的电泳槽需要去RNA酶,也就是说最好是 使用DEPC水事先浸泡过的,其他的条件是一样的。如果得到的总RNA较为完整时,电泳结果会. 显示二条清晰的电泳条带(28S和18S. RNA),其量的比例约为2∶1 。祝试验顺利。
哦,谢谢yinjiye战友
可以跑啊,我前天就跑了,效果不错,和DNA是一样的条件。
不用除RNA酶也跑过,因为电泳时间短,没什么大问题。
RNA可以使用非变性或变性凝胶电泳进行检测。
在非变性电泳中,可以分离混合物中不同分子量的RNA分子,但是无法确定分子量。
只有在变性情况下,RNA分子完全伸展,其泳动率才与分子量成正比。
如果只是为了判断RNA提取物的完整性的话,可以跟跑dna的方法一样。
完整的未降解的RNA制品的电泳图谱应可清晰看到18s rRNA、28s rRNA、5s rRNA的三条带,且28s rRNA的亮度应为18s rRNA的两倍。
采用RNA变性电泳法检测RNA质量,方法如下:
⑴ 凝胶制备:
制备1.2%琼脂糖凝胶(电泳槽体积为50ml)
① 称取0.6g琼脂糖,加入43.5ml水,加热溶解并降温到60℃。
② 加入5ml 10×甲醛变性电泳缓冲液,并加入1.5ml 37%的甲醛,混合均匀。
③ 倒入电泳槽中制胶(甲醛有毒,制胶应在通风橱中进行)。
⑵ RNA模板准备(5~7.5μg total RNA)
① 制备如下混合液 (9.7μl)
10×甲醛变性电泳缓冲液: 1.25μl
37%的甲醛: 2.2μl
甲酰胺: 6.25μl
② 加入2.8μl RNA,使总体积达到12.5μl
③ 混合后离心5~10 sec(1 000~2 000 r/min)
④ 55℃加热15 min
⑤ 加入2.5μl甲醛凝胶加样缓冲液,再加点EB(约0.2~0.5μl),混合后离心5 sec
⑥ 将样品加入点样孔
⑦ 在5v/cm的电压下电泳至溴酚蓝带跑到电泳槽中央(20cm长电泳槽,用95v电压,1小时左右)
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