溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是一种病因不明的慢性复发性炎症性疾病,其不易治愈,并且是结肠癌的主要致病因素[1]。UC的急性发作会引起脱水、脓毒症甚至休克,严重威胁患者的生命安全[2]。UC会损害肠黏膜屏障,导致肠道微生物和内毒素通过肠黏膜侵入,引起全身炎症反应综合征甚至多器官衰竭[3]。在UC中,白细胞介
C57BL/6小鼠(SPF级,雄性,4周龄,成都达硕实验动物有限公司,中国)。乙酸(Sigma公司,美国)。葡聚糖硫酸钠(dextran sulphate sodium,DSS)(相对分子质量:36 000~50 000;MP Biochemicals,Solon,美国)。金荞麦片(Z2302003,康麦斯药业,中国)。果糖(lactulose,L)、甘露醇(mannitol,M)和蜜二糖(Sigma公司,美国)。HE染色试剂盒(Roche公司,美国)。TRIzol和RNeasy Mini试剂盒(QIAGEN GmbH公司,德国)。SYBR Premix Ex TaqTM试剂盒(TaKaRa公司,中国)。PCR仪(ABI7900,ABI公司,美国)。Z
将小鼠饲养在温度为20~25 ℃、相对湿度为55%~65%的环境中,12 h/12 h敏感交替,自由饮食和饮水。将45只小鼠分为对照组、UC组、UC 金荞麦片组(每组15只)。根据文献[8],在适应性喂养1周后将3%的DSS加入到饮用水中连续1周来诱导UC急性反应。UC 金荞麦片组小鼠使用金荞麦片水溶液(32 mg·ml-1)灌胃,剂量为0.02 ml·g-1[9],每日1次,连续7 d。
1.3.1 疾病活动指数 观察各组小鼠体质量变化、粪便黏稠度和粪便隐血,每项总分4分,疾病活动指数为3项得分之和,得分越高提示UC越严重。
伊德里斯著作中提及的早期地理学家包含八世纪的波斯地理学家伊本·胡尔达兹比赫,九世纪亚美尼亚人地理学家艾哈迈德·本·雅库布 (al-Yaqubi),十世纪的基督教修士埃尔西奥·安蒂奥士,十世纪的阿拉伯地理学家豪盖勒 (Ibn Hawqal)和马苏第和《珍异记》,克洛德(Claude)家族的托勒密。 [13]伊德里斯的地理学知识主要来自两个传统:希腊托勒密的地理学传统和早期伊斯兰地理学的巴勒希学派 (见图2)。
1.3.2 结肠长度 小鼠颈椎脱臼后安乐死,取出整段结肠测量结肠长度。
这房子在旷野里,才会这么冷,青梅居的九楼,也有从旷野里吹来的风雪,青梅居会冷吗?应该不会的吧,那新建的房子,不是吹嘘有外墙保温系统吗?即使没有,新建的楼房,密封也好,怎么会任由这北风呼呼地吹进来又呼呼地吹出去?李倩倩、弟弟和妈,此刻都睡在那栋房子里,他们都不会感觉到寒冷。
写话教学是作文教学的启蒙阶段,是作文教学的重要基础。低年级学生阅读面窄,语言积累不足,生活经验缺乏,这些导致学生写话能力发展较为缓慢。因而,我们在语文阅读教学中,重视语言的积累以及语言文字的训练,更能有效地促进学生写话能力的提高。因此抓好小学低年级学生说话和写话的训练,是提高学生作文能力的基础环节。
1.3.3 HE染色 结肠组织用10%甲醛溶液固定48 h,流水冲洗。不同浓度的乙醇脱水,然后将组织浸入蜡中,并切成 5 μm 的厚度。将载玻片置于 65 ℃ 恒温烘箱中30 min。脱蜡水化后染色。细胞核用苏木精染色5 min,细胞质用伊红染色1~2 min。染色切片用纯酒精脱水并在显微镜下观察拍照。
㉚ Sonia Maffei(Cura e Commento),Cesare Ripa’Iconology(1603),testo stabilito da Paolo Procaccioli Pubblicazione,Torino,Einaudi,2012.
1.3.4 ELISA 裂解小鼠结肠组织,离心(4 ℃,20 min,12 000 r·min-1)后使用移液枪小心吸取上层清液,加入抗体孵育2 h后加入显色剂,10 min后终止反应。在450 nm下检测吸光度,根据试剂盒标准曲线计算单位质量组织中IL- 1β和TN
1.3.5 肠黏膜通透性的测量 通过尿L和M比值评估肠黏膜通透性。将300 ml的L和 200 mg的M溶解在20 ml的蒸馏水中,在 12 h的禁食期后灌胃,剂量为1 ml。喂食后1 h,在乙醚麻醉下从海绵窦中取血,使用蜜二糖作为内标通过高效液相色谱测定L和M的浓度,检测L和M的浓度,计算L/M。
根据连通沟地形测量资料及实测断面资料,依据能量方程,按照50 m间距分段依次布设连通沟控制断面,再假定连通沟的过流量及东库水位,采用推求水面线的方法,推求西库水位,建立一组以东库水位为参数的连通沟流量~西库水位关系曲线,分析出连通沟的过水能力。
1.3.6 R
1.3.7 Western blotting 裂解结肠组织,通过离心(4℃,12 000 r·min-1,5 min)收集总蛋白。通过10%的SD
每个指标进行3次平行实验,统计分析使用SPSS 19.0统计软件。数据以平均值±标准差表示,进行方差分析,两两比较行SN
UC组疾病活动指数显著高于对照组,结肠长度显著短于对照组(P<0.05)。UC 金荞麦片组疾病活动指数显著低于UC组,结肠长度显著长于UC组(P<0.05)。见图1、表1。
表1 金荞麦对UC小鼠疾病活动指数和结肠长度的影响
组 别n疾病活动指数/分结肠长度/cm对照组150.00±0.008.56±0.91UC组1510.86±1.15a6.21±0.86aUC 金荞麦片组154.02±0.52ab7.58±0.93abF值20.9907.269P值<0.001<0.001
a 与对照组比较,P<0.05;b 与UC组比较,P<0.05
图1 金荞麦对UC小鼠疾结肠长度的影响
对照组小鼠结肠黏膜屏障完整;UC组小鼠结肠黏膜上皮细胞表现出明显的水肿,结肠黏膜完整性受损,出现炎性损伤。与UC组比较,UC 金荞麦片组小鼠结肠黏膜上皮细胞水肿显著减轻,结肠黏膜屏障完整性得到修复。见图2。
2)本文研究的结果从表2中的肘关节屈曲活动度的平均值走势可以看出,手拿工具的肘关节功能性活动度(用牙刷刷牙)比不拿工具的活动度(用手拿饼干吃)要小。从而康复医学工作者在评估后认为患者肘关节功能性活动度无法再改善时,应提醒患者使用工具或帮助制作特制的工具来改善肘关节功能。
图2 HE染色检测金荞麦对UC小鼠结肠黏膜损伤的影响
UC组结肠组织I
表2 金荞麦对UC小鼠结肠炎症因子水平的影响
组 别nIL-1β水平/(pg·mg-1)TNF-α水平/(pg·mg-1)对照组158.25±0.8611.23±1.18UC组1533.01±3.47 a38.76±4.52 aUC 金荞麦片组1516.98±2.52 ab22.59±3.24 abF值26.82422.824P值<0.001<0.001
a 与对照组比较,P<0.05;b 与UC组比较,P<0.05
UC组肠黏膜L/M为3.25±0.38,显著高于对照组的0.64±0.07(P<0.05);而UC 金荞麦片组肠黏膜L/M为1.79±0.24,显著低于UC组的3.25±0.38(P<0.05)。
UC组肠黏膜组织紧密连接蛋白Z
表3 金荞麦对UC小鼠肠黏膜紧密连接蛋白Z
组 别nZO-1Occludin对照组151.00±0.091.00±0.08UC组150.21±0.30 a0.24±0.30 aUC 金荞麦片组150.49±0.05 ab0.56±0.06 abF值19.18521.242P值<0.001<0.001
a 与对照组比较,P<0.05;b 与UC组比较,P<0.05
图3 Western blotting检测金荞麦对UC小鼠结肠黏膜中紧密连接蛋白Z
UC组结肠组织IL- 6和STAT3 mRNA水平显著高于对照组(P<0.05),UC 金荞麦片组结肠组织IL- 6和STAT3 mRNA水平显著低于UC组(P<0.05),见表4。
表4 荞麦对UC小鼠结肠组织中I
组 别nIL-6 mRNASTAT3 mRNA对照组151.00±0.081.00±0.07UC组155.47±0.52 a5.62±0.51 aUC 金荞麦片组152.56±0.21 ab2.77±0.23 abF值32.90634.759P值<0.001<0.001
a 与对照组相比,P<0.05;b 与UC组相比,P<0.05
UC组结肠组织IL- 6和STAT3蛋白水平显著高于对照组(P<0.05),UC 金荞麦片组结肠组织IL- 6和STAT3蛋白水平显著低于UC组(P<0.05),见图4和表5。
表5 金荞麦对UC小鼠结肠组织I
组 别nIL-6蛋白STAT3蛋白对照组151.00±0.091.00±0.11UC组154.52±0.41 a4.57±0.42 aUC 金荞麦片组151.86±0.15 ab1.98±0.18 aF值32.47831.846P值<0.001<0.001
a 与对照组比较,P<0.05;b 与UC组比较,P<0.05
图4 Western blotting检测金荞麦对UC小鼠结肠组织I
目前UC的病因和发病机制仍不确定,遗传易感性、黏膜免疫系统失调、肠道微生物群失调和饮食习惯等因素是UC发展的重要因素[10]。目前UC的治疗主要采取服用氨基水杨酸、皮质类固醇、免疫抑制剂和生物制剂,重度难治UC需要手术治疗[11]。由于药物无效、药物依赖、不良反应,仍有一部分患者长期遭受UC困扰[12]。因此,为UC寻找新的治疗方法和药物极为重要。
金荞麦分布于东亚和南亚,已被列为国家二级保护植物,并且被我国国家卫生和计划生育委员会批准为功能性食品[13]。在中医机理中,金荞麦性凉,味辛、苦,块根供药用,具有清热解毒活血化瘀之功效[14]。金荞麦具有抗炎、抗氧化、抗菌、抗癌的功能,被批准应用于急性肺脓肿以及急慢性气管炎[15]。金荞麦片与培菲康共同使用能够显著缓解慢性结肠炎患者的临床症状[16]。为分析金荞麦对UC的影响,本研究利用DSS诱导UC急性发作的小鼠模型,然后通过金荞麦片进行灌胃处理。结果表明,UC模型小鼠出现明显的大便性状改变和大便潜血,结肠长度缩短,结肠黏膜组织受损,结肠组织中促炎因子IL- 1β和TN
为进一步分析金荞麦缓解UC抑制炎症反应的机制,本研究检测了IL- 6/STAT3通路以及紧密连接蛋白Z
然而,本研究也有一定的局限性:本实验为定性研究,只表明金荞麦具有抗炎和缓解UC的作用,但是金荞麦治疗UC的药效关系和安全性仍需要进行大量的动物实验和临床研究。此外,关于金荞麦抑制I
综上所述,金荞麦可通过抑制I
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