作者首先用 Western 印迹法检测了 MDA-MB-468 和 MCF-7 细胞中 Nectin-4 的表达。MDA-MB-468细胞中Nectin-4表达过高,而MCF-7细胞中Nectin-4表达较低。流式细胞术和 CLSM 成像的结果进一步表明,在 MDA-MB-468 细胞中,Nectin-4 在细胞表面高表达且具有高度特异性。
放射性核素探针 99m 成功合成了Tc-HYNIC-mAb Nectin-4 ,其放射性标记率(73.03 ± 6.95%)和放射化学纯度(95.03 ± 2.40%)均很高。为了评估这种放射性示踪剂的体外靶向能力,进行了细胞摄取试验。MDA-MB-468 细胞具有特异性体外 99m Tc-HYNIC-mAb。随着时间的推移,摄取率逐渐增加,8 小时时摄取率最高,为 4.27 ± 0.09%。
收集了肿瘤小鼠的显微SPECT/CT图像,以探索 99m Tc-HYNIC-mAb Nectin-4 的体内肿瘤靶向性。Tc-HYNIC-mAb。在实验组中,肿瘤放射性在注射后 3 小时即可被识别,并随着时间的推移逐渐增强。此外,在一些瘤外区域,如心脏和肝脏,早期也有相对明显的放射性,但随着时间的推移逐渐减弱。相比之下,对照组和阻断组肿瘤中的 99m Tc-HYNIC-mA抗体明显较低。Tc-HYNIC-mAb Nectin-4 摄取,而正常肝脏则有持续的放射性积累。作者还对 99m Tc-HYNIC-mAb Nectin-4 摄取量进行了半定量分析比较。Tc-HYNIC-mAb{{5}摄取量,结果与成像结果一致。
受Nectin-4靶向SPECT/CT成像结果的鼓舞,作者进一步设计了一种基于mAb Nectin-4 的荧光探针(mAb Nectin-4 -ICG),作为TNBC异种移植PTT的PTA。-的荧光探针(mAb Nectin-4 -ICG)作为 TNBC 异种移植 PTT 的 PTA。mAb Nectin-4 -ICG在280 n波长处出现特征性吸光度峰。-和游离 ICG 相似。这些结果证明 mAb Nectin-4 -ICG 的合成是成功的。-ICG 的光学特征无明显影响。因此,作者根据不同浓度游离 ICG 的 790 nm 吸光度值进一步确定了回归方程(Y = 0.003244 * X + 0.01402),并以此计算 mAb Nectin-4 -ICG 溶液中 ICG 的浓度。-ICG 溶液中的 ICG 浓度。
为了研究 mAb Nectin-4 -ICG 的光热转换效应,作者记录了 mAb Nectin-4 -ICG 的温升。为了研究 mAb {{0} -ICG 的光热转换效应,作者记录了 mAb {{1} -ICG 在不同浓度或功率密度的 ICG 激光照射下的温升。在不同浓度或功率密度的ICG激光照射下,作者记录了mAb Nectin-4 -ICG的温升。首先,在 mAb Nctin-4 -ICG 溶液中加入不同浓度的 ICG。首先,将不同浓度(0(水)、1、5、10、20 和 30 μg/mL)的 mAb {{2} -ICG 溶液暴露于 1 W/cm 2 功率密度的 808 nm 激光下。结果表明,溶液温度随 ICG 浓度的增加而升高。当 ICG 浓度达到 20 μg/mL 时,溶液温度在照射后 2 分钟内迅速升高,超过 55 °C(起始温度 = 室温:25 °C,△T > 30 °C),并继续缓慢上升。这一结果表明,当 ICG 浓度超过 20 μg/mL 时,细胞损伤温度阈值(42 °C)即可达到。
为了验证 mAb {{0} -ICG 的体外靶向性,将 MDA-MB-468 细胞与这种 PTA 一起培养,然后进行荧光成像。为了验证 mAbNectin-4 -ICG 的体外靶向性,将 MDA-MB-468 细胞与这种 PTA 一起培养,然后进行荧光成像。与mAb Nectin-4 -ICG 共同孵育的细胞有明显的荧光吸收。-ICG共孵育的细胞有明显的荧光吸收,而在被阻断的细胞和游离ICG处理的细胞中只观察到很少的荧光信号。这证明通过抗原和抗体的特异性结合,PTA 可以靶向高表达 Nectin-4 的细胞。荧光强度的半定量分析也支持上述结果。
将 MDA-MB-468 细胞与 mAb {{0} -ICG/free ICG 一起孵育。}-ICG/游离 ICG 培养后,用不同 ICG 浓度、功率强度和照射时间的激光照射分析体外热消融效率。总的来说,游离 ICG、仅 mAb {{1} -ICG}-ICG、仅激光和游离 ICG 加激光的细胞毒性几乎可以忽略不计。仅游离 ICG、仅 mAb Nectin-4 -ICG、仅激光和游离 ICG 加激光各组的细胞存活率均在 90% 以上。在 ICG 浓度为 30 μg/mL 时,仅游离 ICG 组、仅 mAb {{2} -ICG 组和游离 ICG 加激光组都有一定程度的细胞致死率(约 10%),这被认为是游离 ICG/mAb {{3} -ICG 的固有毒性。-ICG的固有毒。
为了探索 mAb Nectin-4 -ICG 的体内肿瘤靶向特性以及 PDT 的最佳时间窗口,研究人员在 MDA-MB-468 TNBC 肿瘤小鼠体内注射了 mAb Nectin-4 -ICG。-ICG和PDT的最佳时间窗,给MDA-MB-468 TNBC肿瘤小鼠注射mAb Nectin-4 -ICG、游离ICG或生理盐水,在不同时间点进行体内FL扫描。-ICG、游离 ICG 或生理盐水,在不同时间点进行体内荧光扫描。mAb Nectin-4 -ICG的荧光信号主要聚集在小鼠的钙化区。-相比之下,注射游离 ICG 和生理盐水的小鼠没有捕获到明显的肿瘤荧光信号。异种移植肿瘤 ROI 的 FL 定量分析和肿瘤/肌肉(T/M)半定量分析也显示了相同的趋势。
利用 MDA-MB-468 肿瘤小鼠进一步研究了 mAb {{0} -ICG 介导的体内 PTT 效应。}-使用 MDA-MB-468 肿瘤小鼠进一步研究了 mAb {{0}-ICG 介导的体内 PTT 效应。mAb Nectin-4 -ICG + 激光组小鼠在接受 808 nm 激光照射后,肿瘤温度在 2 分钟内迅速升高(△T = 15 °C)。-ICG + 激光组小鼠的肿瘤温度在 2 分钟内迅速升高(△T = 15 °C),超过了损伤阈值(42 °C;裸鼠基体温度约为 30 °C),将导致不可修复的组织损伤。相比之下,在激光照射后,游离 ICG + 激光组和生理盐水 + 激光组小鼠肿瘤部位的升温分别不超过 10 ℃ 和 5 ℃(均未达到损伤阈值),这表明游离 ICG 介导的照射或单独的激光照射都无法引发有效治疗所需的高热。在未接受激光照射的小鼠中,肿瘤部位的温度几乎没有变化,甚至略有下降,这可能与持续麻醉有关。
至此,这篇文章就介绍完啦,总结一下:文章首先深入探讨了Nectin-4在三阴性乳腺癌(TNBC)中的表达;第二部分,展示了基于抗Nectin-4单克隆抗体(mAbNectin-4)的治疗诊断对99mTc-HYNIC-mAbNectin-4和mAbNectin-4-ICG在TNBC诊断和光热疗法(PTT)中的应用;第三部分,详细描述了mAbNectin-4-ICG在体内的生物分布和肿瘤定位;第四部分,探讨了mAbNectin-4-ICG介导的PTT在TNBC肿瘤破坏效率和系统毒性方面的表现。整篇文章知识丰富,为作者提供了一个新的TNBC的治疗诊断平台的研究方向,对于从事肿瘤研究的小伙伴来说,这是一个不容错过的学习机会哦!
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